培养斑马鱼卵母细胞体外成熟关键技术优化.pdfVIP

中国农监生物技术学会2008水产生物技术专题磺讨会 培养斑马鱼卵母细胞体外成熟的关键技术优化 魏华 吕 众 上海海洋大学生命科学与技术学院， 上海，200090 摘要：卵细胞培养技术是体外研究卵细胞发育及受精的重要方法之一，是在发育 生物学等诸多研究领域巾有重要应用价值的研究模型。然而目前，与哺乳类、两柄类 动物相比，鱼类作为重要的水生脊椎动物，其卵母细胞培养技术的研究报道还比较少。 斑马鱼(Bracfiyclanlorerio)作为鱼类中重要的模式生物，其卵母细胞的体外培养方法 更具典型性。本文根据斑马鱼卵细胞的特点，筛选了培养过程中的关键技术一卵细胞 适的诱导激素及其浓度，从而优化了斑马鱼卵母细胞培养的关键技术条件，以期为进 一步的胚胎发育学、生理学、毒理学研究提供技术支持。 实验选用了机械分离法和机械一消化酶综合分离法两种方法对斑马鱼卵细胞进 行分离，并对分离效果进行对比。结果表明，在卵母细胞的分离过程中，机械分离法获 得的完整卵细胞的比例为87．0％，而机械一消化酶综合分离法所获卵细胞的完整率仅 为33．2％，二者差异显著f，P0．01)。在操作时问方面，机械分离法平均分离每个卵细 胞所用的时问为0．69分钟，而机械一消化酶综合分离法只需0．17分钟，两利，方法所用 养，卵细胞的存活率和成熟率也显示出两种分离方法各自的特点。机械分离法获得的 卵细胞的存活率为88．2％，显著高于机械一消化酶综合分离法所获卵细胞的存活率 60．1％。两种分离方法所获卵细胞的成熟率分别为83．9％、77．5％，无显著差异(P0． 05)。基于数据所示，机械分离法可以获得存活率较高、完整性较好的卵细胞，但所需 操作时I’fIJ较长；而机械一消化酶综合分离法所需的操作时间短，但其分离出的卵细胞 的活力较差。两种方法对卵细胞体外培养成熟率的影响无明显差异。 在保证了卵细胞的完整性、成活率和成熟率的基础上，分别在培养液中加入不同 浓度的雌激素17a，2013．双羟孕酮、1713．雌二醇，测定不同时问在雌激素诱导下卵母 细胞的成熟率。实验结果显示，在空白对照组、1000ng／m117]]．雌二醇培养液、 39 中国农业生物技术学会2008水产生物技术专题研讨会 酪培养液培养卵母细胞，8h时其成熟率分别为41．7％、60．7％、34．6％、40％。分别以 双羟孕酮和17B．雌二醇对体外培养的卵母细胞的成熟都起到不同程度的促进作用，其 的斑马鱼卵母细胞有更好的成熟促进作用。