利用基因打靶技术研制人类疾病小鼠模型.pdfVIP

利用基因打靶技术研制人类疾病小鼠模型 杨晓 军事医学科学院生物工程研究所发育和疾病遗传学研究室 宏伟的人类基因组计划的顺利实施使人类真正进入了功 致的早期胚胎致死表型并表现出多种疾病相关的表型，将极 Smad4 能基因组学研究的新时代，与日俱增的大量遗传信息正对生 大地促进对 基因在哺乳动物发育和相关疾病过程中 物医学的研究方式和医疗模式产生巨大的影响。发展和应用针 功能及其机制的认识。 对全基因组或全系统的高通量、大规模的整体实验手段，利用 结构基因组学提供的信息和材料研究基因的功能将成为这个 时代生物医学研究的主要特征。基因功能是在由细胞组成的多 层次的复杂生命体中实现的，因此，功能基因组学的研究将会 在极大程度上依赖于对模式生物的研究。小鼠作为被研究的 脊椎动物，尤其具备作为哺乳动物的模式生物具有独特的优 势：首先小鼠是具有较短世代周期的哺乳动物，组织细胞的 生理结构、功能特征和生化途径与人类相似，繁育能力强， 易于在实验室条件下维持；其次，小鼠基因组规模(2 5x 10 9bp)与人类基因组近似，许多染色体区域中同样的 基因以同样的次序排列，拥有众多近交系，可在相对均一的 遗传背景下分析；最重要的是，转基因技术和基因打靶技术的 发展已使得对小鼠遗传物质按预期方式进行活体修饰成为可 能。从21年前第一例转基因小鼠诞生以来，一个重要的罩程 碑是基因打靶技术的发明。作为一种定向改变细胞或者生物 个体遗传信息的实验手段，基因打靶技术在基因功能研究方 面具有其它方法所难以比拟的直接性和有效性，是“后基因 组”时代进行功能基因组学研究的重要平台技术。在基冈打 靶技术十多年的发展和应用过程中，呈现出几个明显的发展趋 势：一是通过条件基因剔除技术在时间和空间上对基因剔除 进行调控；二是发展满足大规模基因功能研究需要的随机基 因剔除技术；三是通过基因敲入技术在基凶组上引入精细突 变以研制精确模仿人类疾病的动物模型。第一代小鼠模型正在 被基于条件基冈剔除技术的第二代小鼠模型所替代。基于 CreLoxP系统的第二代小鼠模型可以模拟与人类疾病相关的 体细胞突变，并对突变进行时空上的调控，提供了激动人心 的新机会，研究已知或者未知基因在疾病的起始、发生和治 疗过程中的作用及其机制。 中国这一领域的研究在国家自然 科学基金和国家“863”计划的支持和培育下已经起步。国家 863计划领域疾病动物模型研发基地已分别在上海和北京初 步建成，建立了稳定的基因打靶研究的技术平台。国家遗传 工程小鼠资源库项目在南京成功实施，对于促进国内相关领域 的研究具有积极的作用。我们实验室近年来一直致力于利用 转基因技术和基因打靶技术研究发育和疾病相关基因的功 能，研制人类重大疾病的动物模型。我们研制了HBsAg和tlBx 基因定位敲入转基因小鼠，转基因小鼠一年后发生高分化肝 细胞癌。为深入研究HBV相关肝细胞癌发生的早期事件及其分 13 信号转导分子 子机制奠定了基础，为了深入研究TGF一 Smads 基因在哺乳动物成体器官发育和相关疾病发生过 程中的作用，我们研制了 Smad4 条件基因打靶小鼠和心肌 细胞、肝细胞、 软骨细胞、肥大型软骨细胞、成骨细胞、胰 腺细胞、皮肤角质细胞、肠道上皮细胞等8种组织细胞特异 性Cre重组酶转基因小鼠。通过将组织特异性Cre重组酶转基 因小鼠与 Smad4条件基因打靶小鼠杂交获得了多种组织 Smad4 特异性 Smad4基因剔除小鼠。组织特异性 基因 剔除小鼠的成功研制可以克服 Smad4完全基因剔除所导 k243、