正肝方诱导Bel-7402人肝癌细胞分化地研究.pdfVIP

正肝方诱导Bel一7402人肝癌细胞分化的研究 杨大国 邓欣 李知玉 聂广 乐晓华 单万水 深圳市东湖医院(518020) 摘要目的：探讨正肝方对Bel一7402人肝癌细胞分化的诱导作用，及对端粒酶活性的影响。方法：正肝 方(主要由黄芪、丹参、鳖甲、女贞子、半枝莲等组成)，由深圳市东湖医院制剂中心制成1．59／ml的水煎剂， C灭 灌喂正常太鼠，每日2次，连续3d，于第4d，1次给予全日剂量后1h采血，制备药物血清，药物血清经56 (MTT)比色法测定细胞增殖，图象分析系统测定细胞核质比，放射免疫法测定甲胎蛋白(AFP)含量，动态 肝癌细胞分化的作用，其机理可能是抑制了Bel一7402细胞端粒酶活性。 关键词 肝癌细胞 中医药疗法 细胞分化端粒酶 诱导分化作为一种肿瘤治疗方法，近年来受到广泛重视。有研究表明一些中药可诱导肝癌细胞分化”3。 本研究采用血清药理学方法，观察中药复方“正肝方”药物血清对Bel一7402肝癌细胞分化的诱导作用，及对 其端粒酶活性的影响。 材料与方法 1．材料 培养物保藏中心。 1．2药物与主要试剂正肝方主要由黄芪、丹参、鳖甲、女贞子、半枝莲等组成，生药均购自深圳市药材 calf (DMSO)为广州市海珠区化学试剂厂产品，小牛血清(fetal 产品，甲胎蛋白(d—Fetel ELISATelomeraseDetection 酶检测试剂盒(TRAPeze 有限公司。 2．方法 2．1药物血清的制备 鼠，每组3只，每日2次，连续3d，于第4d，1次给予全日剂量后1h，戊巴比妥钠腹腔注射麻醉后，无菌条件下 58c灭话30rain，一70。c冷藏备用， 2．2分组及药物血清添加受试细胞分为生理盐水鼠血清阴性对照组、维甲酸阳性对照组、正肝方药物 血清组，共3组。维甲酸避光溶解于0．02％二甲基亚砜中，过滤除菌制成贮液。临用前将各组药物血清加入 2 3细胞增殖的测定 细胞以1×105 ·280· 长630hm测定各孔A值。 尔马林固定，HE染色，图象分析系统测定细胞核及细胞质面积和核质比。 2，5AFP含量测定接种细胞(1×105 640培养液，继续培养48h，收集培养液，用阻 甲酸培养液(10／amol／I．)，培养24h后，更换为不舍药物血清的1 检测AFP。细胞用0．25％胰酶消化，胎盼蓝染色计数。用放射免疫法测定AFP含量。 2．67一GT和AI．P活性的检测 测定。AI。P活性用IFCC推荐的动态比色法测定。蛋白质含量用改良I，owry法测定。 2 7端粒酶活性的检测细胞以1×105 ELISA TelomeraseDetection 性细胞对照组和样本加热灭活端粒酶阴性对照组。 2 8统计方法t检验。 结果 增殖。 寰1莳栩血清对Bel一7402细胞增蕴的影响(MTT法，最士s) 05 注：与对J{ll组比．*P001I#PO 甲酸组细胞质面积显著增高(Po．01)，核质比显著降低(Po．01)。 裹2琦柚血清对BeI一7402细胞棱麓比的影响(x士s) 2主-与对照组比．_PO01 结果见表3。正肝方药物血清组和维甲酸组 3．正肝方药物血清对Bel一7402细胞分泌AFP的影响 囊3药物血靖对Bel一7402胡柏AFP分泌量的影响(Xd：S)