猪圆环病毒2型不同基因型毒株感染性克隆的构建与拯救病毒的体外生物学特性研究.pdfVIP

中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第八次学术研讨会论文集 猪圆环病毒2型不同基因型毒株感染性克隆的构建及 拯救病毒的体外生物学特性研究 郭龙军，陆月华，危艳武，黄立平，刘长明’ (中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室／猪传染病研究室，黑龙江哈尔滨150001) 摘 要：猪圆环病毒2型(PCV2)感染引起的相关疾病日益严重，流行毒株基因不断发生变异，根据病毒基因 组差异分为PCV2a、PCV2b和PCV2c3个基因型，还有PCV2d基因型新报道，这些不同基因型PCV2毒株的致 病性差异有待阐明。采用感染性克隆技术构建了不同基因型代表性毒株，对拯救的毒株进行体外生物学特性试 验。本研究构建了4个不同基因型的PCV2感染性分子克隆，经转化细胞后拯救4个克隆毒株，经核酸序列分 析、病毒形态学观察、免疫过氧化物酶单层细胞试验(IPMA)等证实属于不同基因型的PCV2毒株；拯救的毒株均 TCID。／mL；用具有中和病毒活性的单克隆抗体 通过细胞连续传10代，病毒增殖能力稳定，毒价均可达到los‘0 PCV2流行毒株存在不同基因型，其病毒抗原特性各异，构建和拯救了4个代表不同基因型PCV2克隆毒株，为 进一步研究其致病性差异奠定了基础。 关键词：Pcv2；不同基因型；感染性克隆；病毒拯救；生物学特性 circovirus 2， PCV2变异毒株，将其命名为PCV2d基因型，显示 猪圆环病毒2型(Porcinetype PCV2流行毒株不断变异且有变异毒株出现【16】。 PCV2)主要引起断奶仔猪多系统衰竭综合征(Post- Ciacci等报道临床中不同基因型PCV2共存，其与 weaningmultisystemicwastingsyndrome，PMWS)，该 病于1997年在加拿大首次被证实，美国、法国、日 基因序列与其致病性没有直接相关性，并分离到基 本、韩国等相继发现猪群中存在PMWS【l-31。除 766 PMWS外，猪皮炎与肾病综合征，猪呼吸道综合因组为1 tat的毒株【181；自2003年以来，世界范 征，繁殖障碍，肉芽肿性肠炎，坏死性淋巴腺炎， 围内PCV2基因型存在转型现象，并预言新型PCV2 是更好的适应型毒株，其致病性会增强。Grau等报 渗出性皮炎，先天性震颤14-51等也与PCV2感染有关。 病毒感染的致病性主要与机体免疫系统相互作用有 道目前世界范围内PCV2流行呈现由散发到广泛流 关，PCV2感染对猪免疫功能的影响以及由此引起行趋势。目前，PCV2流行毒株基因型存在PCV2a 的免疫抑制等问题备受国内外学者关注，已成为近 向PCV2b转型现象，但还没有确凿证据证明该两种 年来的研究热点…们。有关PCV2变异的研究不断增基因型存在潜在的毒力差异，并预言将来有可能出 s等 现新的变异毒株1191。世界范围内PCV2不断发生变 多，世界范围内PCV2不断变异【ll。t4}。Segal6 异，我国存在PCV2a、PCV2b和PCV2d3种基因型 (2008)对不同PCV2分离株进行标准命名，主要分 为PCV2a、PCV2b和PCV2c3个基因型，此命名标 流行毒株，不同基因型PCV2生物学特性及致病性 准有利于今后对PCV2的研究和命名规范(www．差异尚未见报道，有必要对我国目前流行的不同基 因型PCV2致病性差异进行深入研究。本研究以不 pcvd．net)[151。此外，Yang等报道中国出现