小鼠胚胎干细胞体外培养体系的研究进展与其应用.pdfVIP

第九届中南地区实验动物科技交流会论文汇编 动物实验研究  小鼠胚胎干细胞体外培养体系 的研究进展及其应用 1  2  邵晓云  ，徐绍业  （1.桂林医学院组胚教研室，2.桂林医学院科技处 桂林  541004） 【摘要】 胚胎干细胞是当今生命科学领域研究的热点。胚胎干细胞具有全能性或多能性、无限增 殖性以及多向分化潜能等生物学特性，具有重要的医学价值，在组织器官移植治疗、新药筛选、疾病模 型的建立、发育生物学及转基因动物研究等方面都具有广阔的应用前景，本文就胚胎干细胞的生物学特 性、培养体系及主要应用前景的最新进展、研究存在问题作一综述。 【关键词】 胚胎干细胞；培养体系；研究进展；应用 小鼠是我国最为常用的实验动物，也是主要的人类疾病模型动物。而且，小鼠胚胎干 细胞 （Embryonic Stem Cell，ESC）的分离建系方法最为成熟。胚胎干细胞是由囊胚的内细 胞团（Inner Cell Mass，ICM）分离培养的具有全能分化特性的细胞，具有长期自我增殖、 自我更新和多向分化的潜能，能够再生出各种功能细胞和组织器官。利用胚胎干细胞体外 诱导分化的成果可望发展出治疗多种疾病的新方法，将在人体早期发育、基因功能、药物 开发、细胞治疗和组织器官替代治疗中发挥重要作用，并成为组织器官移植的新资源。 一、小鼠胚胎干细胞的生物学特性  1.1  形态学特性  ESC 的形态结构与早期胚胎细胞具有相似性，细胞较小，核明显，有一个或多个核仁， 核质比高；在体外培养的小鼠 ESC紧密堆积，呈集落状生长．细胞之间界限不清，集落边 [1]  缘可见少量已分化的扁平上皮细胞或梭形成纤维细胞。 小鼠ESC的直径在7～18μm之间  。  1.2  全能性和多能性 全能性是指 ESC在解除分化抑制的条件下能参与包括生殖腺在内的各种组织形成的发 育潜力，即ESC具有能发育成完整动物个体的能力。多能性则是指 ESC具有发育为多种组 织的能力。ESC 全能性或多能性的基础是其具有高度分化的潜力。ESC 分化的实质是胚胎 发育过程中特异蛋白质的合成。根据“中心法则”理论，任何特异性蛋白质都是由它相对应 的特异基因决定的。细胞分化终究可归结为在胚胎发育过程中基因组中的特定基因按一定 顺序相继地活化和表达。所以细胞全能性的实质是细胞基因组中决定蛋白质编码的所有基 因按一定的时空顺序依次表达。细胞核基因在表达过程中受细胞质因子（如细胞质酶，成 熟促进因子）等影响，因此细胞全能性是细胞核基因在不断变化的胞质环境作用下有次序 821  第九届中南地区实验动物科技交流会论文汇编 动物实验研究  地表达。  1.3  体外增殖性 干细胞作为未分化细胞，其增殖能力和潜力是巨大的。因此，增殖能力被视作干细胞 的特点之一，是干细胞自我维持的基础，也是个体发育和修复损伤和组织再生所必须的。 [2]  小鼠 ESC 每 7～8h 倍增 1 次  。因而，其倍增特性为细胞的遗传操作和细胞分化研究提供 了丰富的实验材料。  1.4  可操作性 在体外抑制分化培养时，ESC不但可以增殖，而且可以被用来进行各种操作。如，将 外源基因导入ESC形成转基因细胞，但仍保持ESC的全能性或多能性；或者利用同源重组方 法插入特定基因 （或删去特定基因），使ESC基因组发生定点突变，形成突变细胞系。转基 因ESC或突变ESC经细胞核移植后可形成各种转基因胚胎（或突变胚胎），最终进一步发育 生产出转基因动物。同时，由于来源于着床前胚胎的ESC的某些细胞表面免疫相关蛋白 （如  MHC）还未来得及表达，用于移植时不易产生免疫排斥反应，因此使其成为移植治疗和细