荔枝核对小鼠S180、EAC细胞生长与凋亡作用的实验研究.pdfVIP

荔枝核对小鼠S。80、EAC细胞生长及凋亡作用的实验研究 广州市中医中药研究所 肖柳英潘竞锵 暨 南 大 学 吕俊华沈文娟 chinensis 荔枝核为无患子科植物荔枝(Litchi Sonn)的干燥成熟种子。夏季采摘成熟果实，除去果皮 及肉质假种皮，洗净，晒干…。荔枝及荔枝核的经济和药用价值逐渐受到关注，近几年来已有多篇报道用 荔枝核中药治疗糖尿病的经验心】。具有调血脂、保肝以及抗氧化等作用∞’4】，特别是荔枝核的多糖成分 在抗肿瘤、提高机体免疫活性方面具有很大的作用。基于以上的研究，本文进一步研究荔枝核对荷瘤小 鼠体内、外细胞生长及诱导细胞凋亡的影响报道如下： 材料与方法 1动物 l。l清洁级。新西兰雄性大白兔，购自广东省医学实验动物中心，实验动物质量合格证号：粤监证 字2006A001 1．2 SPF级小鼠，购自广东省医学实验动物中心，实验动物质量合格证号：粤监证字2006A018 2仪器 2．1 C02恒温培养箱(1herrnofora美国)； 2．2 AIR TECH型医用超净台(苏净集团安泰公司)； 2．3 XSZ—D型倒置生物显微镜(重庆光学仪器厂)； 2．4荧光显微镜(OlympusJapan)； 2．5 BIO—RAD一450型酶标定量测试仪(美国)； 2．6流式细胞仪(FACSCalibur型BectonDickinson)； 2．7 BIO—RAD电泳仪(美国)； 2．8 Eppendoff低温高速冷冻离心机(德国)； 3试剂 3．1荔枝核提取物：颗粒(颗粒：生药=1：io)，广东一方制药有限公司；批号：(0604229) 3．2环磷酰胺(cvx)： 3．3江苏恒瑞医药股份有限公司，批号 3．4 RPIM 1640培养液(GIBCO公司产品)，批号1285082； 3．5青霉素、链霉素(广药白云山天心制药股份有限公司)； 3．6新生牛血清(杭州四季青生物工程材料有限公司产品)，批号060704； 3．7 胰蛋白酶(DIFICO公司生产)； 3．8四甲基偶氮唑盐(MIT，SIGMA公司产品)； 3．9二甲基亚砜(DMSO；4．0美国Amreseo公司产品)； 3．10HoehesG3258(碧云天生物技术公司)； 3．12PI染料sigma； 3．13细胞裂解液(碧云天生物技术公司)； 3．14BAX抗体(cell signaling)； 3．15BCL一2抗体(santacruz)； 3．16GAPDH抗体(Chemicon)； 3．17ECL发光液； 176 3．18pierce批号：H1106361； 3．19 丙烯酰胺sigma； 3．20甲叉丙烯酰胺sigma； 3．21SDS一十二烷基磺酸钠sigma； 3．22 甘氨酸Biorad； 3．24TWEEN一20 sigma； 3．25TRIS—BASE sigma； 3．26TRIS sigma； 3．27脱脂奶粉sigma； 3．28NC膜minipore； 3．29 WHATMAN滤纸whatman； 4方法 4．1实验技术路线 4．2离体细胞实验 4．3在体动物实验 l 观察高中低剂量荔枝核提取物对s。∞，EAc荷瘤小鼠的抑制率的影响 WESTERN I BLOT方法 I 检测各处理组肿瘤组织内BAx，Bc卜．2的水平表达 5实验方法 5．1含药血清的制备 按李仪奎瞪】等方法制备含药血清：将体重约1．5kg的健康雄性新西兰大白兔lO只随机分为高、中、 低剂量组和环磷酰胺(阳性对照)组，另设生理盐水(空