烧伤应激对大鼠W256 移植瘤生长的影响.pdfVIP

烧伤应激对大鼠W256移植瘤 生长的影响 涂亮1，邱宝安2。 1南方医科大学研究生学院，广州510515；2解放军海军总医院 摘要：目的 观察烧伤应激对大鼠W256移植瘤生长的影响。方法将36只皮下种植W256肿瘤细胞的 d 后处死大鼠并检测大鼠血清TNF．Ot、血管内皮生长因子 VEGF ，测量种植瘤的质量，免疫组化法检测肿瘤组织中 的生长。 关键词：烧伤应激；W256肿瘤细胞；移植瘤；血管内皮生长因子；增殖细胞核抗原 中图分类号：R644文献标志码：A 文章编号：1002-266X 2012 16-0039-03 肿瘤生长的微环境对于肿瘤细胞的增殖、转移 W256癌细胞培养于含10％胎牛血清的RPMI1640 及血管生成具有重要意义【1]。机体在创伤应激后 培养基，置于37℃、5％C02、相对湿度90％的培养 产生一系列生物学反应，致使机体内稳态破坏，可能 箱中培养、传代，至对数期，取lmL注入Wistar幼大 影响肿瘤的发生和发展【2]。了解创伤促进肿瘤发 鼠腹腔传代培养。l周后抽取癌性腹水，离心弃上 生和转移的机制对于癌症的治疗具有重要意义。烧 清，取下层黏稠细胞悬液，PBS液配制成 细胞计数 伤后机体大量释放炎性细胞因子，可使免疫功能紊 1×109／mL 乳白色含瘤悬液。取0．15mL接种于 乱，影响肿瘤生长的微环境。2011年3—9月，我们120 g左右Wistar大鼠腹股沟皮下，共接种45只。 以烧伤作为对大鼠机体的一种创伤应激，研究烧伤 3—5 d后可触及直径约O．5cm皮下肿瘤结节。 应激对大鼠W256移植瘤生长的影响，并探讨其潜1．2．2分组及烧伤处理接种5d后取36只接种 在临床意义。 肿瘤成功的大鼠 部分接种失败不予入组 随机分 1材料与方法 成3组 ／／, 12 ：A组 对照组 仅背部去毛，不予烧 1．1材料SPF级Wistar幼大鼠50只，雄性，体质 伤处理；B组 轻度烧伤组 背部去毛并予100℃开 量80～100 g，由海军总医院实验动物房提供。 cm×3 水烫伤5s，烧伤面积3 cm；c组 重度烧伤 W256癌细胞，由解放军海军总医院实验室提供；大 cm×4 组 背部予100℃开水烫伤10fl,，烧伤面积4 鼠TNF-理、VEGF酶联免疫吸附法 ELISA 试剂盒购 cm。具体操作在麻醉状态下进行 3％戊巴比妥钠， 自武汉博士德生物工程有限公司；羊抗鼠血管内皮 0．1mL／100 g，肌注 ，将大鼠背部朝下固定于制好 生长因子 VEGF 单抗、羊抗鼠增殖细胞核抗原 cm×3 ca×4 的木板 分别留有3 cm、4 cnl孔径 ， PCNA 单抗均购自美国SantaCruz公司，正常山羊 置于电子恒温水浴锅 100℃ 内烫伤。烫伤后观察 血清工作液、生物素标记的二抗工作液及SABC免 至大鼠苏醒后分笼饲养，并提供充足食物和水。 疫组化试剂盒购自福建迈新生物工程公司。RPMI1．2．3血清TNF-et、VEGF检测烧伤后10d处死 1640培养基购自赛默飞世尔生物化学制剂有限公 3组所有大鼠，心脏取血，离心，取上层血清。血清 司；胎牛血清购自杭州四季青生物工程材料有限 公司。 浓度，单位pg／mL，检测方法参照试剂盒测试说明书 1．2方法 进行。 1．2．I 皮下移植瘤模型制作参照文献旧1方法： 1．2．4肿瘤质量测量沿肿瘤包膜完整分离皮下 肿瘤组织，测其质量。 ·通讯作者。E-mail：hckqiu@medmsil．Ⅻ．cn 1．2．5PCNA、VEGF表达检测分离的肿瘤组织 39 万方数据 出丕医药垫!呈生箜墼鲞箜!垒翅 常规固定，石蜡包埋，切片，采用SABC法检测肿瘤环血液中淋巴细胞重新分布到淋巴组织中，且以T 组织VEGF及PcNA表达，具体操作严格按照试剂细胞为主，并使淋巴细胞滞留于淋巴结、骨髓、脾及 盒说明书进行。VEGF阳性判定标准及计数参照有胸腺，致使循环血中淋巴细胞数目明显减少M』。肿 关文献HJ：细胞质内出现棕黄色颗粒状染色为阳 瘤的形成和进展不单只与肿瘤细胞本身有关，它是 性，在高倍镜下 ×200 对每张切片随机选取5个一种由多种异形细胞相互作用而形成的复杂组织， 视野，每个视野计数200个细胞，共计1000个，计 由此产生肿瘤微环境的概念p1。在肿瘤微环境中 算阳性细胞的百分数。定义VEGF阳性表达细胞数浸润的免疫细胞，其抗肿瘤效应的下调有利于恶性 10％为 一 ，≥10％为 + 。PCNA阳性染色仅肿瘤的进展、新生血管的形成及向特定部位的转 限于细胞核内，呈棕黄色颗粒或弥漫性分布；参考文 移哺J。烧伤后炎症应答包括释放大量的促炎细胞 献【5|，每张切片随机取10个高倍视野 x400 ，计因子，