三角紫叶酢浆草犐犛犛犚反应体系的建立与优化.pdfVIP

草 业 学 报 第 卷 第 期 １４２－１５０ ２０ ５ 年 月 ， ２０１１ １０ ＡＣＴＡＰＲＡＴＡＣＵＬＴＵＲＡＥＳＩＮＩＣＡ Ｖｏｌ．２０Ｎｏ．５ 三角紫叶酢浆草犐犛犛犚反应体系的建立与优化 ， １３ ２ ２ 胡盨 ，王永清 ，陶炼 （ 四川农业大学林学院，四川 雅安 ； 四川农业大学园艺学院，四川 雅安 ； １． ６２５０１４２． ６２５０１４ ３．四川省农业科学院生物技术核技术研究所，四川 成都 ６１００６６） 摘要：采用正交设计直观分析法，对影响三角紫叶酢浆草 反应较大的 个因素（ ２＋ 、 酶、引物、模 ＩＳＳＲ－ＰＣＲ ５ Ｍ Ｔａ ｇ ｑ 板 、 ）在 个水平上进行优化实验；从 个随机引物中筛选出适宜的引物，并筛选出其最佳退火温度； ＤＮＡ ｄＮＴＰ ５ １００ 最后对反应程序进行优化。由此首次建立了适合三角紫叶酢浆草的 反应体系： 反应液中含 ＩＳＳＲ－ＰＣＲ ２５ Ｌ １０ μ ， ２＋ ／ ， 酶 ，引物 ／ ，模板 ， ／ 。 ×ｂｕｆｆｅｒ２．５ ＬＭ １．２５ｍｍｏｌＬＴａ ０．９Ｕ ０．３ ｍｏｌＬ ＤＮＡ６０ １００ｎ ｄＮＴＰ０．２５ｍｍｏｌＬ μ ｇ ｑ μ ～ ｇ 反应程序为： 预变性 ； 变性 ，退火时间 （根据不同引物选择对应最佳退火温度）， 延伸 ９４℃ ５ｍｉｎ９４℃ ５０ｓ ６０ｓ ７２℃ １．５ ，循环 次； 延伸 ， 保存。这一优化系统的建立为今后利用 标记技术研究酢浆草属植物提 ｍｉｎ ４０ ７２℃ ７ｍｉｎ４℃ ＩＳＳＲ 供理论依据和技术参考。 关键词：三角紫叶酢浆草； ；反应体系 ＩＳＳＲ 中图分类号： ； 文献标识码： 文章编号： （ ） Ｑ９４６３３Ｑ９４９．７５２．１ Ａ １００４５７５９２０１１０５０１４２０９  三角紫叶酢浆草（ ）是酢浆草科（ ）酢浆草属（ ）多年生草本植物。其叶 犗狓犪犾犻狊狋狉犻犪狀狌犾犪狉犻狊 Ｏｘａｌｉｄａｃｅａｅ 犗狓犪犾犻狊 犵 片常年为紫红色，叶型奇特，形似飞舞的紫蝴蝶，花期长达数月，花朵白色点缀于紫叶之上别致醒目，是一种极具 观赏价值的彩叶植物。酢浆草属是一个世界性大属，主要分布于非洲和南美洲。国外对酢浆草属植物的研究报 ［］ ［，］ １ ２３ 道主要集中于其生物学特性研究、植物分类和系统进化 、次生代谢产物提取及结构功能分析 等领域。分子 标记技术应用于酢浆草属植物的报道主要针对安第斯山脉的块茎作物酢浆薯（ ）及其相近种开 犗狓犪犾犻狊狋狌犫犲狉狅狊犪 ［，］ ［ ］ ［ ］ ［，， ］ ４５ ６９ １０ ７９１１ 展，涉及亲缘关系分析和系统分类 、遗传多样性分析 、遗传退化 和种质资源保护分析 等方面。我 国也有较丰富的酢浆草属植物资源（包括本土种和外来种），在中国大陆由南到北及海南、香港和台湾地区都有广 ［ ］ ［ ， ］ ［ ］ １２ １３１４ １５１７ 泛的分布 。相关研究主要局限于个别种类的快繁体系建立 和园林应用、植物分类和系统进化研究 、 ［ ， ］ ［ ， ］ 抗性生理研究 １８１９ 、生物入侵和土壤生态学研究 ２０２１ 。国内利用分子标记对酢浆草属植物进行分类、种质资源 鉴定和遗传多样性的研究相对较少。 ［ ］ ２２ （ ，简单重复序列区间）是由 等 在 （ ＩＳＳＲ ｉｎｔｅｒｓｉｍ ｌｅｓｅｕｅｎｃｅｒｅｅａｔｓ Ｚｉｅｋｉｅｗｉｃｚ ＳＳＲ ｓｉｍ ｌｅｓｅｕｅｎｃｅ ｐ ｑ ｐ ｐ ｑ ）标记的基础上创建的分子标记技术。 标记不依赖基因组序列信息，适用的物种广泛，多态性较 ｒｅｅａｔｓ ＩＳＳＲ ｐ （ ，随机扩增多态性 ）高，重复性更好而实验结果更可靠。该技 ＲＡＰＤ ｒａｎｄｏｍａｍ ｌｉｆｉｅｄ ｏｌｍｏｒｈｉｃＤＮＡ ＤＮＡ ｐ ｐ ｙ ｐ 术现已广泛应用于植物（包括草本地被植物）的遗传作图、分子标记辅助育种、种质资源鉴定、遗传多样性分 ［ ， ］ ［ ］ ２３２４ ２５ 析 、植物分类和系统进化分析、进化生物学及分子生态学等领域 ，但在酢浆草属植物上的应用研究报道较 ［］ ［，，］ ７ ６８９ 少。Ｍａｌｉｃｅ等 和 Ｐｉｓｓａｒｄ等 已将 ＩＳＳＲ标记应用于南美洲的酢浆薯的遗传多样性研究，系列报道中ＩＳＳＲ ［］ ６ （ ， ，聚合酶链式反应）的技术参数均建立在 等 的报道基础之上。 －ＰＣＲＰＣＲ ｏｌｍｅｒａｓｅｃｈａｉｎｒｅａｃｔｉｏｎ Ｐｉｓｓａｒｄ ｐ ｙ 其中， 的引物选择参考了适用于稻属（ ）植物、硬粒小麦（ ）和马铃薯（ ＩＳＳＲ－ＰＣＲ 犗狉狕犪 犜狉犻狋犻犮狌犿犪犲狊狋犻狏狌犿 犛狅犾犪 狔 ）等已开发