1991年诺贝尔生理医学奖 膜片钳技术与单离子通道.ppt

1991年诺贝尔生理医学奖?膜片钳技术与单离子通道 得奖者： 埃尔文·尼赫尔（Erwin Neher） 贝尔特·萨克曼（Bert Sakmann） 人物简介 德国生物物理学家，1991年诺贝尔生理学和医学奖得主。1944年3月20日出生于德国巴伐利亚州的兰茨贝格，父亲弗朗茨?尼赫尔管理着一个乳业公司，母亲为教师，他有二个姐姐。他在故乡生活、读书到1963年，1963—1966年在慕尼黑工业大学学物理学，1966年获富布赖特奖学金去美国，在威斯康星大学麦迪逊分校学一年，1967年获生物物理学硕士学位回慕尼黑。1968—1972年在德国马克斯?普朗克研究所的实验室，1970年获慕尼黑工业大学物理学博士。1972—1982年为该研究所实验室副研究员，1983年为该研究所膜生理部主任。1986年为德国哥廷根大学名誉教授，1989—1990年在美国加州理工学院新时代的学者。现任德国马克斯?普朗克研究所所长、教授。 萨克曼还得过： 1982年希伯莱大学第一任校长马格内斯奖； 1991年理工大学哈维奖。萨克曼的夫人克里斯时蒂安，是位眼科医生，他们有二个儿子和一个女儿。 得奖内容： 发现细胞的单一离子通道之功能 （for their discoveries concerning “the function of single ion channels in cells ） 「单一离子通道记录法」（single channel recording or patch clamp recording） 膜片钳技术 原理：用特殊处理过的玻璃微电极压在细胞膜上, 玻璃微电极和细胞膜片间形成高电阻封闭，这一封闭对膜片进行了电和化学的隔离。由于电的隔离以及玻璃微电极的低电阻, 只要简单地对玻璃电极提供一个电压,就能对膜片进行电压钳位。膜片的直径为0.5-1微米, 在膜片内一般有4 -6 个离子通道, 大多数情况下只有一个通道。从玻璃微电极引出的微小电流通过电流电压变换装置, 在示波器上可观察到一系列矩形等幅脉冲, 电流图形显示通道是以全或无的方式随机开放的时间 离子通道 细胞是构成生物体的基本单位，细胞是通过细胞膜与外界隔离的，在细胞膜上有很多通道，细胞就是通过这些通道与外界进行物质交换的。这些通道由单个分子或多个分子组成，允许一些离子通过。信号的调节影响到细胞的生命和功能。 生物体内的各种细胞由于周遭离子分布的不均匀，因此在平常静止状态时，细胞内所带的电荷是“－＂的，而细胞外通常是比较“＋＂的，这就是所谓的静止膜电位（resting membrane potential）。当细胞兴奋时如神经的传导，肌肉的收缩或腺细胞的分泌，细胞膜上的离子通道（如Na+ channel）就会打开，让Na+离子由细胞外进入细胞内产生去极化现象（Depolarization）。 Neher and Sakmann 记录了流经单一离子通道的电流 已知细胞膜上的离子改变是快速的，但Neher和Sakmann是第一发现有特殊的离子通道实际存在。为了说明离子通道的作用方式，所以必须记录通道是如何开启和闭合的。流经单一离子通道的离子性电流十分微小，这似乎难以证明前述情况。此外，有小的离子通道分子嵌在细胞膜上。Neher和Sakmann成功地解决了这些困难点。他们发明了细小的玻璃微量吸管（直径为a thousandths of a millimeter）作为记录电极。当微量吸管接触进入细胞膜，微量吸管的孔洞周围会形成紧实的密封状（Figure 1A, B）。微量吸管内外部的离子改变，仅发生在膜上的离子通道。当单一的离子通道开启，带电的离子将会移动通过离子通道，形成电流。经过精密的电子设备，他们成功地估量出实验中的精微电流（”microscopical” current）。 ? 单一离子通道记录法的发明 他们利用一个毛细玻璃管，管口的直径比一个细胞还小，大约只有二到三微米（10-6米）。如果这个毛细管口非常干净，在显微镜底下将它轻轻压位细胞的表面，再加点吸力，细胞膜就会紧紧黏在管口上。如果细胞膜上有一个离子通道的分子，经过电流的记录仪器，就可以记录在这个离子通道进出的离子流。 应用这套技术，顺利地记录出青蛙肌肉细胞上单一离子通道流过电流的大小。Neher和Sakmann的结果显示，肌肉细胞的细胞膜上一个离子通道可通过的电流约为二十微微安培（10-12安培），换成离子数目大约是每秒通过一亿个离子。 How Does an Ion Channel Operate?离子通道是如何运作的？ 离子通道有数种不同的型态。有些只允许带正电的离子通过，例如钠离子、钾离子、或钙离子等，有的只允许阴离子通过，如氯离子。Neher和Sakmann发现了这种特异性是很完备的。其中