血瘀证目征和血管内皮细胞损伤的关系的实验研究.pdfVIP

第八次全国中西医结合血瘀证及活血化瘀研究学术大会论文集 血瘀证目征与血管内皮细胞损伤的关系的实验研究 黄敏1谢建祥1吴锐2黄国栋2王善超3李国贤2 1．江西省儿童医院(南昌，330006) 2．南昌大学第一附属医院(南昌，330006) 3．江西省中医院(南昌，330006) 血瘀证目征是李国贤教授通过观察白睛赤络判断有无血瘀证的望目诊法提出的一种诊断血瘀证的新 方法[1]，现也成为世界医学关注的课题之一，然而对血瘀证目征的产生机理通过动物实验来验证尚未进 行。本研究旨在探讨vWF、ET-1在血瘀证目征中的表达及意义，进一步阐述血瘀证目征的产生机理。 l材料与仪器 1．1实验动物健康新西兰种大白兔，雌雄各半(雌兔未孕)，5月龄，体重在2kg左右：I级合格动物， 54只。按性别、体重等随机分为6组，每组9只，分别为气虚血瘀组、气滞血瘀组、寒凝血瘀组、热毒血 瘀组、外伤血瘀组、正常对照组。于实验前1周购进实验动物，安静环境分笼饲养，温度控制在(25--+1) ℃，相对湿度为60％，自由或限量摄入水食，对照组、外伤血瘀组喂食基础饲料，其他组喂食高脂高糖饲 料(配方为-猪油1596、白糖8％、胆酸钠1％、胆固醇5％、丙基硫氧嘧啶0．2％、基础饲料71．8％)。 ③vwF放免药盒(购于北京经纬博恒生物科技开发有限责任公司，批号：100226)；④ET一1放免药盒(购于 山甲69酒大黄129桃仁99。将药液置4℃冰箱备用，用时取出，用蒸馏水稀释至所用浓度。 1．3主要仪器：∑960型酶标仪：球结膜微循环仪加装血瘀证目征软件。 2实验方法 2．1模型建立 2．1．1气虚血瘀型[2，3]：根据中医理论“劳则耗气”、“饥则损气”、“气为血之帅”，采用力竭式游泳 制作此模型。于造模前1周进行游泳训练并喂以高脂高糖饲料(配方为：猪油15％、白糖8％、胆酸钠1％、 胆固醇5％、丙基硫氧嘧啶0．2％、基础饲料71．8％)，造模期间，每兔每日仅喂以上高脂高糖饲料40克。水 温控制在40度左右，隔日1次，2～3min／次，使之适应游泳环境。实验过程中，采用力竭游泳(劳累)、 饥饿并高脂高糖饮食造模，每周第1--．5天进行力竭游泳造模，共3周，力竭标准控制为兔沉入水中10秒 不能自行浮出水面，从水中提起后即用电吹吹干被毛。 2．1．2气滞血瘀型[4]：每日上午9AM用粘有胶布的夹子夹住兔的尾巴(力度适中，产生疼痛但不造成皮 249 第八次全国中西医结合血瘀证及活血化瘀研究学术大会论文集 肤损伤)，使其保持激怒状态，每次45分钟。3PM于双腿分别刺入针灸针，断续波电脉冲刺激6小时／日， 共3周。实验期间同时自由采食上述高脂高糖饲料。 高糖饲料。 2．1．4热毒血瘀型[6]：实验前l周始，动物即喂饲如上所述的高脂高糖饮食(自由采食)。实验时予角叉 u 菜胶10 h后给予细菌脂多糖50g／kg，iv。 mg／kg，ip：16 2．1．5 外伤血瘀型[7]：将兔右后肢平放于击伤器底座平台上，参照《实用中医证候动物模型》[8]提供 的“定量化重力击打法”采用重锤造成重创，使之形成外伤血瘀模型。 2．1．6正常对照组：常规饲养，不造模，与其他各组同步第一、三周采集血液标本；每日测量兔体质量、 平均进食量变化、皮毛色泽、爪甲颜色、精神状态等一般状况。 2．2动物给药方法：造模成功后：气虚血瘀组给以补阳还五汤、气滞血瘀组给以血府逐瘀汤、寒凝血瘀组 给以温经汤、热毒血瘀组给以犀角地黄汤、外伤血瘀证组给以复元活血汤。根据兔体征表象以及血瘀证目 给予灌胃，1次／d，连用2周。 2．3模型评价方法[8]：根据1986年修订的血瘀证诊断标准，模型成功具体评价指标如下。 2．3．1身体表征：如活动减少、进食下降、毛发变黄无光泽，大便溏稀或干结臭秽，与对照组相比体重增 加缓慢。 2．3．2舌象：舌质紫暗或有瘀斑。 2．3．3球结膜微循环改变：微血管通透性增高，血管边缘模糊。部分血管怒张，扭曲，瘤样改变，旁路微 血管网形成。血流速度变慢，颗粒感增强，呈粒线流或粒流或微血管周围弥漫性或点片状渗血。 法，∑960型