中国沙皮犬线粒体多态性与分子进化的初步研究.pdfVIP

中国沙皮犬线粒体多态性和 分子进化的初步研究 刘清神’ 苏艳华2 冯定远。大村刚3 (1．华南农业大学动物科学学院广州510642； 2．云南大学生物资源保护和利用实验室；3．香港传统中国沙皮犬评审及繁殖者) 摘要：本研究对中国沙皮犬广东原产地种质群mtDNA的D-loop第一高变区扩增片 段569bp进行了遗传多样性和分子进化分析。单倍型、NJ树和ML树等分析结果表明， 85个中国沙皮犬个体享有21种单倍型，单倍型的多样度为达0．936，首次发现中国的家 犬品种(即中国沙皮犬)拥有E枝系中的单倍型，初步揭示了沙皮犬母系遗传背景的多态 性和复杂性，从分子水平上证明了中国沙皮犬是一个古老的犬种，‘为今后更深入研究世界 家犬的起源提供了我国一个备选犬种，研究结果也启示中国广东在世界家犬起源中可能起 着重要的作用。 关键词：中国沙皮犬mtDNADNA多态性 分子进化 Chinese 中国沙皮犬(The Shar-pei)是原产于我国广东省佛山市南海区大沥镇的一种 世界名犬。目前，原产地沙皮犬数量极少，且种质极为混乱。至今为止，利用mtDNA碱 基序列对中国沙皮犬群体单倍型的研究和分析尚属空白。本研究对广东原产地的中国沙皮 犬群体进行比较全面的采样，研究对象选用沙皮犬mtDNAD-loop的第一高变区进行，试 图分析沙皮犬种质群体mtDNA的多样性状况，旨在为保护和利用中国沙皮犬提供科学依 据，并进一步通过分子进化探讨我国南方这一珍贵犬品种在世界家犬起源中所起的作用和 地位。 1材料与方法 1．1材料 1．1．1试验动物血样 85只沙皮犬的血样采自广东省佛山市和广州市；2只拿破仑犬和2只川东猎犬采至广 州市新良丰动植物繁育有限公司；2只德国狼犬的血样采自华南农业大学宠物医院。 1．1．2主要仪器设备 RAD Thermal PCR及成像设备：BioDNA Pettier Engine GeneGeniusBio 3730 ImagingSystem成像系统。测序仪：ABI SequenceAnalyser (ABD730全自动DNA序列仪)。 1．2方法 1．2．1沙皮犬血液DNA的抽取 190 L。 浓度。稀释生25ng／u 1 22 mtDNA的PCR反应 5’--AAACTATATGTCCTGAAACC--3’引物长：20 bD。反应体系为：模板DNA(25tIg／ uL)1i1L，lOXbuffer(含20mmoFLMgCl2)2．0 uL，BSA0．4u I¨上下游引物(3 L)01 L，无菌 umoi／L)各1．5uL，rTaq聚合酶(5u／11 0u 双蒸水补至总体积20 测。 1 23目的片段的回收和纯化 用1．5％的琼脂糖凝胶对PCR产物进行检测，并按“小胶[uI牧试剂盒”产品说喇书(上 LDNA 海华舜生物工程有限公司生产)，将目的片段经切割、回收和纯化后，制成30u L，用ABI 洗脱液稀释至lOu∥u 3730全自动DNA序列仪进行正反链测序。涮序PCR反 Terminatarv3．I Inc．。