文冠果皂甙生物转化初步研究.pdfVIP

2013’中国生物发酵产业年会 文冠果皂甙生物转化的初步研究 洪振宇1 田晶p许柏艳1徐龙权2 1．大连工业大学生物工程学院大连 116034；2．大连工业大学现代教育技术部大连116034 【摘要】文冠果是我国特有的油用和民间药用植物，但是文冠果果壳常被作为废弃之 物，对其化学成分研究不多。文冠果果壳中含有多种皂甙类成分，具有抗炎、护肝、抗 肿瘤以及机体免疫调节等药理特性。本文初步研究了黑曲霉印．铭茵产酶液水解文冠果 皂甙的方法，确定酶解条件为：水解文冠果皂甙糖基的最适底物浓度为3％，最适pH为 5．o，最适反应温度为50℃，最适反应时间为40h。该研究为进一步深入开展文冠果皂甙 的应用提供有价值的参考。 sorbif01ia 微苦，性凉，能祛风除湿，消肿止痛，敛干黄水，主要用于治疗风湿性关节判21，曾列 入《中华人民共和国药典》(1977年版)【”。国内外学者已对其枝、叶、花、果柄、种 仁、果壳、木材等部位的化学成分及药理活性进行了一些研究一’5“]。文冠果果壳中含 有脂肪酸、甾醇、皂甙等多种化学成分，其中皂甙类成分为文冠果的主要活性成分。现 代研究表明文冠果果壳中含有多种皂甙类成分，含五环三萜母核的皂甙类化合物具有广 泛的药理作用和重要的生物活性，尤其在抗炎、护肝、抗肿瘤以及机体免疫调节等方面 已经显现出令人关注的药理特性‘71。通过生物转化改变天然皂甙的结构将获得具有更高 生物活性的皂甙，作为食品添加剂用于功能性食品及保健品工业，将提高产品附加值， 具有重要的开发应用前景。 1．仪器与材料 文冠果壳(购于内蒙古赤峰林场)；黑曲霉印．钳(由大连工业大学菌种保藏所提 desilice60 供)；薄层层析板Gel 计(美国PE公司)；LC一20AD高效液相色谱仪，SPD．20A检测器(日本岛津)。 2．方法与结果 2．1文冠果皂甙的提取分离 称取文冠果壳粉末2009，在70℃用7倍量70％乙醇回流提取2次，每次3小时， 过滤回收浓缩乙醇，将浓缩液用乙酸乙酯(1：l，v～)萃取，除去部分杂质，水层继 466 第六部分功能发酵制品篇 续用水饱和正丁醇(1：1，VⅣ)萃取，合并正丁醇层，浓缩得褐色浸膏。将褐色浸膏 过AB．8大孔树脂纯化，浓缩蒸干，得黄褐色粉末。 2．2酶液的提取 酶液。 2．3文冠果皂甙的酶解 2．3．1酶反应的最佳底物浓度 配制1．0％、1．5％、2．O％、2．5％、3．O％五种不同浓度的文冠果皂甙底物。取5个 后，50℃条件下反应40小时，水饱和正丁醇终止反应，分层后取上清液进行TLC分析， 结果如图1所示：底物浓度低于3％时，转化较彻底，因此选择3％作为此酶反应的最适 底物浓度。 图1底物浓度对酶反应的影响 1、2、3、S、4、5分别为1．0％、1．5％、2．0％、底物、2．5％、3．0％ 2．3．2酶反应最适pH值 在最适底物浓度的基础上，取5个DOF管分别加入0．1111L pH值为3．0、4．0、5．0、 50℃条件下反应32小时，水饱和正丁醇终止反应，分层后取上清液采用TLC分析结果， 到酶解产物减少，本实验选择pH5．0作为酶反应的最佳pH值。 467 2013’中国生物发酵产业年会 ’ 图2pH对酶反应的影响 1、2、3、S、4、5分别对应pH值3．0、4．0、5．O、底物、6．0、7．O 2．3．3酶反应的最适温度 的3％的文冠果皂甙底物，分别于30℃、40℃、50℃、60℃、70℃条件下反应32小时， 水饱和正丁醇终止反应，分层后取上清液采用TLC分析结果，结果如图3。由图3可以 看出：在40℃．50℃时，酶活性较高。超过60℃，得到酶解产物减少。温度为50℃时， 酶解更完全，因此，选择50℃作为酶反应的最适温度。