shRNA 介导的hWAI L 表达沉默对人宫CaSki 细胞增殖与凋亡的影响木.pdfVIP

中国病理生理杂志 ChineseJournalofPathophysiology 2013，29(7)：1213-1218 · 1213 · [文章编号] 10004·718(2013)07-1213-06 shRNA介导的hWAIL表达沉默对人宫颈癌 CaSki细胞增殖与凋亡的影响木 潘巍巍 ， 徐 营 ， 曹利仙 ， 沈忠飞 ， 郭连军 ， 宋方洲 (。重庆医科大学生物化学与分子生物学教研室，重庆400016；嘉兴学院医学院生物教研室，浙江嘉兴314001) [摘 要] 目的：为探讨人半翼(hWAPL)蛋白在细胞增殖与凋亡中的作用及其作为分子靶点用于肿瘤治疗 的潜在价值，本研究用 RNA干扰技术抑制hWAPL基因的表达 ，并观察了其对人宫颈癌细胞CaSki细胞增殖和细胞 凋亡的影响。方法：实时荧光定量PCR和Westernblotting检测hWAPLshRNA的干扰效率；MIT检测细胞增殖； AnnexinV-PE和 Hoechst33258染色检测细胞凋亡 ；蛋白质印迹分析凋亡蛋白cleavedcaspase-3和细胞周期抑制蛋 白p21、p27的表达。裸鼠荷瘤模型体内研究^ 沉默对 CaSki细胞增殖 的影响。结果：实时荧光定量 PCR和 Westernblotting检测结果表明，筛选到的hWAPLshRNA能有效抑制内源hWAPL的表达。MTY实验表明shRNA介 导的hWAPL表达沉默显著抑制 CaSki细胞的增殖。AnnexinV．PE分析结果表明，hWAPL沉默增加了凋亡细胞数 目。细胞核经Hoechst33258染色出现浓染致密的固缩形态和颗粒状荧光；蛋白质印迹结果显示cleavedcaspase．3、 p21和p27表达增加；裸鼠成瘤实验表明，hWAPL沉默的肿瘤体积减小，增殖细胞核抗原 (PCNA)蛋白表达增加。 结论 ：hWAPL沉默抑制 CaSki细胞增殖 ，促进细胞凋亡，是一个潜在的肿瘤治疗新靶点。 [关键词] hWAPL蛋白；短发夹RNA；细胞凋亡；CaSki细胞 [中图分类号] R373．39 [文献标志码] A doi：10．3969／j．issn．1000．4718．2013．07．012 EffectsofshRNA-mediatedhWAPL silencingonproliferationandapopto- sisofhumancervicalcancerCaSkicells PANW ei．wei，XUYing ，CAO Li．xian。，SHENZhong．fei，GUOLian-jun，SONGFang． zh0u (DepartmentofBiochemistryandMolecularBiology，Chongqing MedicalUniversity，Chongqing400016，Chi— na；DepartmentofBoiloyg，ColelgeofMedciine，J／axingUnivers~y，Ja／xing314001，China．E—mail：fzsongcq@163．corn) [ABSTRACT] AIM：Toinvestigatetheroleofhumanwingsapart-like(hWAPL)proteininproliferationnad apoptosisofhumancervicalcnacerCaSkicellsthroughhWAPLgenesilencingbyspecificshorthairpinRNA (shRNA) duplexes．METHODS：TherelativehWAPLmRNA nadproteinexpressionlevelsweredetectedbyreal—timefluorescence quantitativePCR andWestern blotting，respectively．CellproliferationW88detectedbyMTIassay，andtheapoptosisWas determine