比布列西猩红-蛋白质体系的共振光散射及分析应用.pdfVIP

广西师范大学学报(自然科学版) 2003年10月 OF JOURNALGUANGXINORMAI。UNIVERSITY 比布列西猩红一蛋白质体系的共振光散 射及其分析应用 谭克俊，黄承志。，李原芳 (西南师范大学化学化工学院环境化学所．重庆400715) 了共振光散射技术以来．我们利用该技术，建立了十分灵敏的测定痕量DNA的方法o…．随后，共振光散 射技术广泛用于痕量蛋白质、金属离子、表面活性剂和药物的测定中．本文报道了一种简单灵敏的蛋白质 测定方法——比布列西猩红共振光散射方法． 1实验部分 在10．0mI。比色管中依次加人适量BrittonRobinson缓冲溶液，适量的1 的25 mg／I。蛋白质溶液或样品溶液和适量2×10mol／I。比布列西猩红溶液，每加入一种试剂后都旋涡 混合，最后用二次水稀释至10．0mI，，完全混合．以缓冲溶液作参比，扫描其吸收．保持凡，=九。，狭缝宽度 为5．0nm下扫描220．0～600．0nm范围内RI。S光谱．在286．0nm处测定RI。s强度． 2结果与讨论 从光谱图(图1)看，比布列西猩红在508．0nm处有一吸 收带，加入牛血清白蛋白，其特征吸收带未见发生位移，只是 表现出微弱的减色效应．很明显，在450．0～600．0nm段吸 收的微弱降低不能用于蛋白质的测定．在pH一2．2l，比布列 西猩红和BSA在220．0～600．0nm范围内的共振光散射信 号极弱．而在该波长范围内，BS与BSA的混合物却有很强的 R1，s信号，表明BS与蛋白质发生了作用，最大RI，s峰位于 X／11111 286．0 D_Iil处，通过优化试验，最佳酸度为pH2．21，离子强度 图I BSA与BS作用的共振光散射光谱图 为0．12mol／I。．在优化条件下，测得BS蛋白质体系的线性方 for BS(except5 0mol儿)．40×10。tool／I： 0；2．30；3．2 1 0 程、线性范围、检测限等分析参数如表l所示．本方法灵敏度 BSAlmg／I．)：1．4 0，t 0，5．5 6 0 0 21．ionicst c)i2nml／1 高，检测限达到ng级．常见金属离子如ca”和K+等的干扰 pH2 rengtll 较小，允许量较大．而重金属离子如Hg”的允许量相对较小但在测定样品时(如人血清中蛋白质的含 基金项目：国家自然科学基金资助项目 作者简介：谭克俊(1968一)．男，副教授研究方向：生物光化学分析E—mail：tankj@swnu．edL，．cn 第21卷 广西师范大学学报(自然科学版) 量)，可以通过加水稀释样品减少这些离子的干扰．本实验方法中，大多数物质不发生干扰． 用HSA作为标准来测定HSA和7 血清样品中总蛋白质含量都在正常值范围． Parametersforthe ofDifferentProteins Table1 Analytical Determination 6 1 ConcentrationofBSis as×10mol／L；ionic 12 21；^=286．0nill expressed strength．0mol／L；pH2