白苏活性成分提取和生物活性研究实验方案-侯丹.docVIP

白苏活性成分提取和生物活性研究试验方案 侯丹 2010-7-21 试验目的 在医药方面的研究表明，白苏茎和半边莲有很好的医用价值。现对其农用活性做一些初步的研究。本试验通过对植物材料中活性成分的提取、生测、分离以及进一步生测，初步研究其对农用植物病原真菌的抑制效果。 试验材料 植物材料：白苏茎 生物材料：所用到的生物材料主要是植物病原菌，如下表所示： 表一：生物材料 供试病原菌 标识 拉丁名 辣椒疫霉病菌 LY Phytophthora capsici Leonian. 苹果炭疽病菌 PT Glomerella cingulata. 小麦赤霉病菌 XCh Glomerella zeae. 水稻纹枯病菌 ShW Thanatephorus cucumers. 番茄灰霉病菌 FH Botrytis cinrerea Pers. 小麦纹枯病菌 XW Rhizoctonia cerealis. 棉花黄萎病菌 MH Verticillium dahliae Kleb. 试验步骤 植物材料活性成分提取 提取 将植物材料样品在40℃下晾干、粉碎、用95%的乙醇浸泡提取3次，每三天提取一次，用旋转蒸发仪去除回收提取溶剂，将粗提物转移到青霉素瓶中，待辅助转移的 溶剂挥发完以后，称重，记录数据，密封，于冰箱中保存，备用。 白苏茎粗提物重量为18.0109g。 计算各自提取率 半边莲提取率W（%）= 粗提物的生物活性测定 将白苏粗提物用丙酮配置成1g干样/ml的药液，并以同一瓶中的丙酮做对照，用PDA培养基，在无菌条件下对新转接的上述7种病原菌转接用生长速率法做生物活性测定。对测定结果做统计分析，计算抑制率，筛选出抑制率在80%以上的病原菌，用 于进一步的生测。用同样的方法和步骤对半边莲粗提物进行生物活性测定。 表一：生测数据统计结果 浓度（g/ml） 病原菌 抑制率（%） 3d 4d 5d 6d 白苏叶 LY PT 40.00 26.83 13.54 XCh （100.00） 86.72 （100.00） 78.39 （100.00） 64.32 ShW （100.00） 50.00 50.00 50.00 FH 80.00 76.36 69.74 XW （100.00） 57.04（100.00） 51.69 （100.00） 46.81 MH 71.91 12.96 24.59 注：上表中括号中的红色数字是重新生测的抑制率数据。 活性成分分离 薄层色谱 用实验室常用的有机溶剂（石油醚、乙酸乙酯、甲醇等）配成不同极性的展开剂，对白苏粗提物做薄层色谱分析，找到一种能将白苏粗提物中物质尽可能分开的展 开剂，用于下一步柱层析流动相的参考。 柱层析 将紫苏粗提物生测后余下的部分，称重，用60~80目的硅胶拌样，用十倍于样品重量的200~300目的硅胶对紫苏粗提物样品进行柱层析分离，每150ml为一个馏分，对每一馏分做薄层色谱，相邻组分之间比较鉴定，将成份相近的馏分合并为一个组分，编号。 用各组分对筛选出来的病原菌做生测 按照3.2中的方法步骤，分别对白苏分离出来的组分做生物活性测定，对生测数据进行统计分析，计算抑制率。 预期结果 通过以上的试验，预期紫苏和半边莲两种样品各自至少对7种病原菌中的一种，抑制率达到95%以上。 讨论 对试验做讨论分析和展望，为下一步工作指明方向。