定量PCR管理制度和操作规程.docVIP

定量PCR管理制度 1非本室工作人员未经允许不得进入实验室。 2各区的用品不得混用。 3.仪器须有专人负责，并有使用维护记录；实验人员必须熟悉仪器性能后方允许操作，并严格遵守操作规程。 4．所有试剂进购、配制、质检、使用均要有记录，未经允许不得随意带出本实验室。 5.每天了解仪器运转情况及试剂使用情况，确保仪器整洁安全，试剂合格使用。 荧光定量PCR仪操作规程一、仪器开/关机程序 1、开机程序 1.1 打开电脑，进入桌面。 1.2 打开icycler PCR仪器的电源开关（注：该仪器有两个电源开关，一个控制PCR仪，一个控制光源系统）。 1.3 双击桌面上的软件图标，点击“yes”,进入软件的主菜单。 2、关机程序 2.1 保存数据，退出软件的主菜单。 2.2 关掉电脑，关闭icycler PCR仪器的电源开关。 二、程序文件的设置及打开 1、 实验程序已预先设定 1.1 点击软件左方主目录中的“Library”，进入该界面后。 1.2 选择“View Protocol”页面，根据路径，找到预存的程序文件。 2、 创建新的程序文件 2.1 点击软件左方主目录中的“Workshop”，进入该界面。 2.2 选择“Edit Protocol”页面，输入相应的温度、时间、重复的循环数（Repeats），增加或删除步骤（Cycle和Step），在“Select data collection step（s）”中选择需要进行荧光收集的步骤。 2.3 完成后，在“Protocol Filename”中输入程序的文件名，点击“Save this protocol”。 三、仪器操作程序 1、编辑样本 1.1 将装有反应液的PCR反应管放入PCR仪，记录样本摆放顺序。 1.2 点击进入软件左方主目录的“Workshop”界面，选择“Edit Plate Setup”页面。 1.3点击“Samples：Whole Plate loading”，根据样本摆放的顺序和样本属性，选择相应的图标（Unknown和Standard），在plate上相应位置作标识，是标准品（Standard）的，在屏幕右下方的“Standard Quantity”中输入相应浓度。 1.4点击“Select and load fluorophores”，在“1. or deselect a fluorophore”中选择荧光标记，在“2.Assign a color”中选择该标记相对应的颜色，然后在plate上对 1.3所选择的孔位进行荧光标记。 1.5 完成后，在“Plate Setup Filename：”中输入样本文件的文件名，点击“Save this plate setup”。 2、 运行 2.1 编辑样本完成后，在该页面下点击“Run with selected protocol”。 2.2 转入“Run Prep”页面，确认“Select run purpose”所选的是“PCR Quantification Melt Curve”和“Select well factor source”所选的是“Experimental Plate”，核对一下“Selected Protocol”和“Selected Plate”的文件名是否正确。 2.3然后在“Sample volume”中输入反应体系，点击“Begin Run”，在弹出的对话框中输入要保存的数据文件名称，点击保存。 3、数据分析 3.1 点击软件左方主目录中的“Library”，进入“View Post-Run Data”页面。 3.2 找到并选中要分析的数据文件，点击“Analyze Data”，转入“Data Analysis”界面。3.3 根据“baseline”和“Threshold”分析原则，进行数据分析，观察PCR Standard Curve”。 作者 朱敏 单位 中国仪器之家 本文仅代表作者观点,与中国仪器之家立场无关. ed-X研究院神经科学与工程中心实验室配有ABI7900HT荧光实时定量PCR仪，使用该仪器要网上预约： ( Calendar( 登录：medx_pcr 密码： Realtime, 在YAHOO的日历本上预留使用仪器的时间，并留下姓名和联系电话。同时通知负责老师。 使用仪器时在边上的记录本上写下实际使用时间等资料，有问题及时反映。 注意：凡接触PCR板都要戴手套，使用干净的实验台，避免污染，。 使用： 根据实验需要选用96孔或384孔板 （如要更换不同模式，联系许瑾），装板后用透明封口膜封好，用转平板的离心机转1500rpm 5 分钟，把孔内的液体离心到底部。实时定量PCR容易受污染，所以实验操作要小心，尤其是板的底部不能直接接触台面 （96孔板配有一个黑色的