广东与平县猕猴桃遗传多样性的研究-.pdfVIP

广东和平县猕猴桃遗传多样性研究书 陈晓玲谢振文 梁 红 ● (仲恺农业技术学院生物技术研究所广州510225) 摘 要广东省和平县是我国猕猴桃栽培南界，其栽培品种和野生资源十分丰富。本研究运用 RAPD分子标记方法，探讨猕猴桃栽培品种及野生种之间的亲缘关系和遗传多样性。 试用了3种猕猴桃DNA提取的方法，从中筛选出一种适合于猕猴桃基因组DNA提取的方法 ——改良SDS法，运用该法提取的DNA能够满足PCR扩增的要求并得到较好的扩增效果。对 RAPD反应体系和参数进行优化，得到了良好的扩增效果并提高了稳定性。从50个随机引物中 筛选出lO个具有较高扩增多态性的引物进行RAPD扩增并进行扩增片段多态性比较和聚类分析。 发现野生种与栽培品种之间有较大的差异，但中华猕猴桃和美味猕猴桃两个种内的各个栽培品种 之间在聚类上互有交叉；野生种“黄毛”与其他野生种和栽培种的相似性系数低于65％，应单独 聚一类；主栽品种‘和平1号’、 ‘金早’和‘金魁’的相似性系数大于85％，亲缘近。 关键词猕猴桃同工酶RAPD遗传多样性 一种重要的水果资源。全世界现有猕猴桃属66个种，其中62种原产中国(黄宏文，2000)。 猕猴桃属植物广泛分布于我国以及朝鲜、日本、俄罗斯、锡金、不丹、印度、越南等国家 在江西、云南、安徽、湖北、河南、广西等省，云南和广西等省份的分类群和特有分类群最 多。广东省有猕猴桃属植物分布的县(市)达42个，其中粤北山区种类最多，资源丰富。(邢 福武等，1990；张爱玉，1999)。和平县地处粤东北山区，其西北面与江西定南县接壤，是我 国美味猕猴桃、中华猕猴桃自然分布的自然分布区之～，也是广东省惟一的猕猴桃产区(梁红， 2002)。该县20个镇(乡)都有野生猕猴桃分布，共有5个野生种：灰毛猕猴桃、黄毛猕猴桃、 毛花猕猴桃、多花猕猴桃、京梨猕猴桃；猕猴桃种植已遍布全县各个乡镇(梁红，2002；杨曼 倩，1999)。 家关注的问题。猕猴桃属现行的分类系统主要是依据果实和叶表被绒毛的类型和程度以及果 et 实表面的斑点等少数几个形态学性状(Huang 24种，可分为净果组和斑果组。李惠林认为该属为36个种和一些变种，以其表皮毛的宏观 形态学特征为主要依据分为4个组：净果组、斑果组、糙毛组和星毛组(Li，1952)。后来， 梁畴芬修订了李惠林的分类系统，将净果组分为片髓系和实髓系两系，将星毛组分为完全星 毛及不完全星毛两系，构成了猕猴桃属下4组4系的现行分类体系(梁畴芬，1984)。不同学 者从不同的角度开展了猕猴桃属植物的遗传学和系统学研究，以寻求更充分的遗传学和分子 系统学证据，建立猕猴桃属植物的系统发育及亲缘关系。如花粉形态(康宁等，1993)、叶表 ·广东省人大议案项目“猕猴桃品种引进和改良”部分内容 ·148· 等方面的研究。对猕猴桃属下分类单位的划分、系统发育等方面也仍有许多不同的意见。 属从形态性状、营养成分、性别到染色体倍性变异都有很高的多样性。同工酶研究表明猕猴 et 桃在栽培品种和物种水平都存在高度的多样性(Huang 桃属植物的遗传多样性研究虽然取得了很大的进展，然而在分子水平上的研究资料还不多， 特别是对县域范围内的猕猴桃属植物进行种内和种间遗传多样性研究还未见报道。我们在对 广东省猕猴桃产区和平县猕猴桃资源进行形态学观察和同工酶分析的基础上，进一步从分子 水平上研究其猕猴桃的分类、区域分布和系统进化，以期能为猕猴桃资源的开发利用，发展 区域猕猴桃产业提供一些科学依据。 ． 1 材料与方法 1．1植物材料 本实验所采用的实验材料取自广东省和平县水果研究所品种园，嫁接于仲恺农业技术学 院实验场内。取未展开的幼叶为提取DNA的材料，即取即用。 1．2试剂 U／uL)，RNA酶和DNAmarker购于北京鼎国生物技术公司， Taq酶购置于上海生工公司(5 dNTP(浓度为10 50个随机引物，引物长度为10bp。均由上海生工公司合成。 1．3主要设备