干扰结肠癌上皮细胞Ascl2 的表达致其向杯状细胞表型分化.pdfVIP

第３４卷第１９期 第　三　军　医　大　学　学　报 Ｖｏｌ．３４，Ｎｏ．１９ １９３６ ２０１２年１０月１５日　　　　　　　　　　 Ｊ　Ｔｈｉｒｄ　Ｍｉｌ　Ｍｅｄ　Ｕｎｉｖ 　　　　　　　　　　 Ｏｃｔ．１５　２０１２ 论著 文章编号：１０００５４０４（２０１２）１９１９３６０４ 干扰结肠癌上皮细胞Ａｓｃｌ２的表达致其向杯状细胞表型分化 李晓桓，朱　蓉，田　音，汪荣泉　　（４０００３８重庆，第三军医大学西南医院全军消化病研究所） 　　［摘要］　目的　探讨转录因子Ａｓｃｌ２对结肠癌细胞分化的影响。方法　采用Ａｓｃｌ２分子干扰质粒和对照质粒对结肠 癌ＨＴ２９和ＬＳ１７４Ｔ细胞进行转染，通过 Ｇ４１８筛选建立稳定转染的细胞系，采用 ＲＴＰＣＲ和Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ方法检测干扰 Ａｓｃｌ２分子表达对肠杯状细胞标志物Ｍｕｃ２和ＴＦＦ３表达的影响。结果　成功构建了ｓｈＲＮＡＡｓｃｌ２／ＥＧＦＰ质粒以及对照质 粒ｓｈＲＮＡｃｏｎｔｒｏｌ／ＥＧＦＰ，经测序与预期相符，Ｇ４１８筛选获得 ｓｈＲＮＡＡｓｃｌ２／ＨＴ２９、ｓｈＲＮＡＣｔｒ／ＨＴ２９、ｓｈＲＮＡＡｓｃｌ２／ＬＳ１７４Ｔ 和ｓｈＲＮＡＣｔｒ／ＬＳ１７４Ｔ稳定转染细胞。ＲＴＰＣＲ和Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ检测证实干扰质粒能够有效地抑制ＨＴ２９和ＬＳ１７４Ｔ细胞内 的Ａｓｃｌ２的表达（Ｐ＜０．０１）。ＲＴＰＣＲ检测发现Ｍｕｃ２和ＴＦＦ３ｍＲＮＡ表达水平在Ａｓｃｌ２干扰后的ＨＴ２９细胞内均明显上 调（Ｐ＜０．０５）；Ｍｕｃ２ｍＲＮＡ表达水平在 Ａｓｃｌ２干扰后的ＬＳ１７４Ｔ细胞内明显上调，差异有统计学意义（Ｐ＜０．０５），但是 ＴＦＦ３ｍＲＮＡ表达水平在Ａｓｃｌ２干扰后的ＬＳ１７４Ｔ内升高不明显（Ｐ＞０．０５）。Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ检测发现Ｍｕｃ２蛋白质表达水平 在Ａｓｃｌ２干扰后明显上调（Ｐ＜０．０５）。结论　干扰结肠癌ＨＴ２９和ＬＳ１７４Ｔ细胞内Ａｓｃｌ２的表达导致其向杯状细胞的表型 分化。 　　［关键词］　 Ａｓｃｌ２；结肠肿瘤；肿瘤细胞，培养的；细胞分化；杯状细胞 　　［中图法分类号］　Ｒ３９４．２；Ｒ７３０．２３；Ｒ７３５．３５　　 ［文献标志码］　Ａ ＩｎｔｅｒｆｅｒｅｎｃｅｏｆＡｓｃ１２ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｉｎｃｏｌｏｎｃａｎｃｅｒｅｐｉｔｈｅｌｉａｌｃｅｌｌｓｌｅａｄｓｔｏｔｈｅｉｒｄｉｆｆｅｒｅｎ ｔｉａｔｉｏｎｉｎｔｏｐｈｅｎｏｔｙｐｅｏｆｇｏｂｌｅｔｃｅｌｌｓ ＬｉＸｉａｏｈｕａｎ，ＺｈｕＲｏｎｇ，ＴｉａｎＹｉｎ，ＷａｎｇＲｏｎｇｑｕａｎ（ＩｎｓｔｉｔｕｔｅｏｆＧａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ，ＳｏｕｔｈｗｅｓｔＨｏｓｐｉｔａｌ，ＴｈｉｒｄＭｉｌｉｔａｒｙＭｅｄｉｃａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｃｈｏｎｇｑｉｎｇ，４０００３８，Ｃｈｉｎａ） 　　［Ａｂｓｔｒａｃｔ］　Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ　 ＴｏｄｅｔｅｒｍｉｎｅｔｈｅｅｆｆｅｃｔｏｆｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎｆａｃｔｏｒＡｓｃｌ２ｏｎｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎｏｆｃｏｌｏｎ ｃａｎｃｅｒｃｅｌｌｓ．Ｍｅｔｈｏｄｓ　 ＣｏｌｏｎｃａｎｃｅｒＨＴ２９ａｎｄＬＳ１７４ＴｃｅｌｌｓｗｅｒｅｔｒａｎｓｆｅｃｔｅｄｗｉｔｈｓｈＲＮＡＡｓｃｌ２ｉｎｔｅｒｆｅｒ ｅｎｃｅｐｌａｓｍｉｄａｎｄｓｈＲＮＡｃｏｎｔｒｏｌｐｌａｓｍｉｄ，ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．Ａｓｔａｂｌｙｔｒａｎｓｆｅｃｔｅｄｃｅｌｌｌｉｎｅｍｏｄｅｌｗａｓｅｓｔａｂｌｉｓｈｅｄｂｙ ｓｃｒｅｅｎｉｎｇＧ４１８．ＥｆｆｅｃｔｏｆｓｈＲＮＡＡｓｃｌ２ｉｎｔｅｒｆｅｒｅｎｃｅｐｌａｓｍｉｄｏｎｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆｇｏｂｌｅｔｃｅｌｌｍａｒｋｅｒｓ，Ｍｕｃ２ａｎｄ ＴＦＦ３ｍＲＮＡａｎｄｐｒｏｔｅｉｎｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ，ｗａｓｄｅｔｅｃｔｅｄｂｙＲＴＰＣＲａｎｄＷｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔａｎａｌｙｓｉｓ．Ｒｅｓｕｌｔｓ　 Ｔｈｅ ｓｕｃｃｅｓｓｆｕｌｌｙｃｏｎｓｔｒｕｃｔｅｄｓｈＲＮＡＡｓｃｌ２／ＥＰＧＦｐｌａｓｍｉｄａｎｄｓｈＲＮＡｃｏｎｔｒｏｌ／ＥＰＧＦｐｌａｓｍｉｄｗｅｒｅｃｏｎｆｉｒｍｅｄｂｙ ｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇ．Ｓｔａｂｌｙ