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声明 1.本PPT由《脐带间充质干细胞对CIA大鼠炎症因子的干预》一文改编。 2.本PPT所涉及资料和图象均仅用于学习参考,不得用于商业目的或其它目的。 3.若使用本PPT所涉及资料和图象,应向相关拥有知识产权使用权的网站购买,并标明出处。 脐带间充质干细胞对CIA大鼠炎症因子的干预 背景:脐带间充质干细胞可表达多种胚胎干细胞的 特有分子标志,具有分化潜力大、增殖能力 强、免疫原性低等特征。 目的:观察脐带间充质干细胞对类风湿性关节炎免 疫炎性的病理过程的干预作用。 方法:实验分为3 组,建立Ⅱ型胶原诱导的类风湿 性关节炎模型大鼠,脐带间充质干细胞组于 造模后第4 周经大鼠尾静脉注射脐带间充质干 细胞,模型组注射生理盐水。 引言 类风湿性关节炎(rheumatoid arthritis,RA)时白细胞介素1、白细胞介素6、白细胞介素18、肿瘤坏死因子a(tumor necrosis factor-a, TNF-a)等炎症因子相互作用形成了一个细胞因子网络。其主要功能是促进B细胞增殖与分化,促进类风湿因子的合成,促进肝细胞合成急性期蛋白,从而增强炎症过程,加重关节病变。它们亦可直接损伤内皮细胞,激活血小板,影响纤溶系统等,同时诱导内皮细胞、白细胞等合成释放各种炎症递质、黏附分子扩大炎症反应,加重免疫炎性血管和关节损伤,促进血液呈高凝性改变。 脐带间充质干细胞(umbilical cord mesenchymal stem cells,Uc-MSC)表达多种胚胎干细胞的特有分 子标志,具有分化潜力大、增殖能力强、免疫原性 低、取材方便、不受道德伦理限制等特征受到临床 关注。课题以CIA大鼠为观察对象,探讨RA炎症黏 附因子水平变化及Uc-MSC对其的干预作用。 材料和方法 设计:随机对照动物实验。 时间及地点:实验于2009-09/2010-06在扬州 大学医学院完成。 材料:雌性近交系SD大鼠30只,清洁级, 4~6周龄,体质量为(162±20) g,购于南京医 科大学实验动物中心。 主要试剂 试剂及仪器 来源 鸡Ⅱ型胶原 Sigma 公司 冰乙酸(分析纯) 中国恒利试剂厂 L-DMEM、胎牛血清、胰蛋白酶 美国 Gibco公司 大鼠白细胞介素 1、大鼠白细胞 美国 RD公司 介素 6、大鼠白细胞介素 18 ELISA 试剂盒、大鼠 TNF-a ELISA 试剂盒、大鼠血管细胞 黏附分子 1(vascular cell adhesion molecule-1,VCAM-1) ELISA 试剂盒、FITC Mouse Anti-Rat CD11b、FITC Mouse lgA 实验方法 Uc-MSC的制备:将人的脐带剪成组织块后贴 壁培养72 h,去除未消化的组织块,将原代脐 带间充质干细胞用胰蛋白酶消化后加入含有体 积分数10%胎牛血清的L-DMEM培养基终止消 化,反复吹打,移入离心管中离心10 min后, 去掉上清液,加入培养基后吹打,移入培养瓶 中,37 ℃、体积分数5%CO2培养箱中培养, 至第3代消化、离心后用生理盐水将Uc-MSC细 胞浓度调至2×109L-1,4 ℃保存备用。 CIA大鼠模型建立:雌性近交系SD大鼠,随机分为正常组(见 图1a)、模型组(见图1b)、Uc-MSC组,每组10只。制备0.01 mol/L乙酸溶液中溶解的鸡源性Ⅱ型胶原 (质量浓度为5 g/L), 充分溶解后与完全弗氏佐剂(CFA)等体积混合,并充分乳化成 Ⅱ型胶原乳剂。予20只大鼠右后足跖皮内注以0.1 mL免疫大 鼠,第21天时再次以每只0.1 mL的剂量同部位皮内多点激发 注射免疫大鼠,建立Ⅱ型胶原诱导的类风湿性关节炎大鼠模型。 各组大鼠处理:取Uc-MSC 2×109L-1,于造模后第4周Uc- MSC组经大鼠尾静脉注射,模型组注射生理盐水0.5 mL。 Uc-MSC表型鉴定: 采用流式细胞术对CD14、CD34、 CD44、CD45、CD73、CD90、CD105及HLA-DR表面标记 进行表型分
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