马尾藻属藻类多糖和猪卵母细胞体外成熟及其凋亡的关系.pdfVIP

第十二届全国动物繁殖学术讨论会论文集 马尾藻属藻类多糖与猪卵母细胞体外成熟及凋亡的关系 文国艺何若剐石德顺王士长 (广西大学动物科技学院．南宁，530005) 摘要本研究就马尾藻属藻类多糖对猪卵母细胞的体外成熟及凋亡进行7探索：试验一证明，体 外培养46—48h时．成熟液添加马尾藻属藻类多糖能促进卵丘细胞扩展，添加ZOmg／mL马尾藻属藻 类多糖能提高核成熟率(418％)，与对照组29．3％的核成熟率相比，二者差异显著；试验二证明，添加 mL马尾藻属藻类多糖的猪卵母细胞存活率分别为2．6％、18．9％、23．0％，添加与否差异显著。 关键词猪，卵母细胞，马尾藻属藻类多糖。体外成熟，存活率 随着现代胚胎工程技术的不断发展，人们对 为止，与其他的哺乳动物相比，猪卵母细胞的体 马、牛、羊、猪等动物卵母细胞体外成熟的研究在 外成熟率不够理想，有许多因素影响到猪的体外 不断地深入，获得具有较强发育能力的卵母细胞 成熟，但马尾藻属藻类多糖的相关研究未见报 是各种后续相关胚胎工程技术的前提和关键点， 道。近年来，海洋生物资源的科研及开发日渐受 如体外受精、性别控制、克隆及转基因等等。都需 到人们的重视，大量的海洋生物制品或活性提取 要良好的卵母纽胞体外成熟手段作为技术平台。 物对众多疾病的防治效果显著，对人类的健康产 近年来．因为猪的内脏器官的大小与人类相似、 生了不可估量的影响，在生物医学的科研及临床 取材容易、不太会引起伦理道德争议、疾病与人 及人们的日常生活都有大量应用，本试验选择生 类差异大不易传染等诸多优点，引起了世界生物 物活性较强的马尾藻属藻类多糖添加到成熟培 医学领域前所未有的重视，猪将成为人类未来最 养液．来评价其对卵母细胞体外成熟及凋亡的影 可能的器官来源，缓解甚至从根本上解决人类移 响。 植器官短缺的问题，即便现在器官捐赠工作良好 1试验材料与方法 的美国，每年需要器官移植的人多达78，000人1．1猪卵母细胞的收集 以上，而能获得器官移植的人不足22，000人，平 试验所用猪卵巢均来自南宁郊区屠宰场当 均每一天有16人死于器官供应不足，因此，对猪 日凌晨屠宰的本地母猪，预先将一定体积与生理 的研究逐渐成为热点和新的经济增长点，许多上 盐水等渗的PBS液，根据当日气温加热到适宜 市公司投巨资进行猪的研究(1、2)。但是，至今温度． 作者简介：文国艺(1966一一)。男(汉)．湖南耒阳人，副研究员，硬士(博士生课题、广西自然科学基金项目桂科海： 9817114)(武汉大学细胞生理学研究生毕业．英国剑桥大学访问学者。主要从事动物完全体外化和体细胞克隆研究(国 com) 7171信箱xvrl233734@sina ——139—— 第t-二届全国动物繁殖学术q,-,．j-论会论文集 装入保温瓶后提前一定时间交到卵巢收集者手 移入装有lmL7％的发情母牛血清TCM一199 中，在屠宰后尽可能快地取回卵巢，卵巢越新鲜 培养液的四个培养皿中，分别含0me,／mL、5mg／ 约好，离体时间～般不长于2h，实验室取出卵巢 mL、20rag／mL、40mg／mL马尾藻属藻类多糖， 时的温度以32—36℃为宜，最低不能低于26℃，另加少量卵泡颗粒细胞进行协同培养，将平皿放 因为猪卵母细胞对低温特别敏感，极易遭受冷休 入气相为5％coz的空气、温度为39℃、相对饱 克的打击；卵巢用消毒加热的PBS液洗涤两次， 和湿度的培养箱中，进行静态体外同步成熟培 如果回收温度在32℃以下，就需要适当加热使 养，培养46—48h时进行成熟观察，以有清晰第 —极体的作为核成熟指标。试验2将颗粒细胞 卵巢温度达到37—38(2，然后按常规方法抽取 卵母细胞，选取细胞质均匀的卵母细胞，置于含