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百草枯对神经胚胎干细胞分化过程中 Notch信号通路分子表达的影响 复旦大学 常秀丽副教授 研究背景 百草枯（Paraquat，PQ ）  非选择性触杀型、灭生性除草剂  全世界使用最广的除草剂之一  中国是目前世界生产、使用最大国家之一 PQ与中枢神经系统病变  流行病学研究表明，暴露于除草剂的人群PD发病率显著高于普通 人群  PQ低剂量腹腔注射可致成年C57BL小鼠黑质部多巴胺能神经元减少  对黑质多巴胺递质系统造成特异性的损伤 研究背景 发育期神经系统易感性 研究背景 ？ 研究背景 神经干细胞（Neural stem cells, NSCs ）  自我更新  对称分裂，产生与母细胞相同的两个子细胞，增加NSCs的数 量  不对称分裂，即一次分裂产生一个与母细胞相同的子细胞和 一个定向分化细胞  多向分化  神经元  胶质细胞 百草枯对Notch信号通路的影响 Notch信号通路 百草枯对Notch信号通路的影响 Notch信号通路  抑制性的信号转导通路  Notch信号途径被激活，NSCs进入增殖状态，抑制定向分化；反 之，NSCs则启动分化程序  Jagged1和Delta1在发育的神经上皮中表达，与Notch一 起参与了中枢神经系统的发育过程 研究目的 本研究应用人胚胎神经干细胞，研究百草枯对其 分化中Notch信号通路中关键分子表达的影响，初步 探讨百草枯对人胚胎神经干细胞的损伤机制。 研究内容 ReNcell CX细胞的复苏与传代培养 ReNcell CX细胞的形态学观察 与免疫荧光鉴定（nestin） 去除生长因子，12d ReNcell CX细胞诱导分化 PQ对分化过程中的NSCs 活力的影响 分化后神经细胞形态学观察 去除生长因子， 与免疫荧光鉴定 PQ染毒12d PQ对Notch信号通路关键分 子表达的影响 研究方法 NSCs培养与特征鉴定：免疫荧光 ReNcell CX细胞的诱导分化：免疫荧光 染毒 细胞活力鉴定：采用MTT法 实时荧光定量PCR  结果 人胚胎神经干细胞(ReNcell CX 细胞)的形态学观察 200 × 100× 倒置相差显微镜下神经干细胞形态（P1） 人胚胎神经干细胞(ReNcell CX 细胞)的形态学观察 倒置相差显微镜下神经干细胞形态（P9 ，100×） 人胚胎神经干细胞(ReNcell CX 细胞)免疫荧光鉴定 免疫荧光染色Nestin阳性细胞 人胚胎神经干细胞(ReNcell CX 细胞) 诱导分化 神经元