蒺藜苜蓿二氢黄酮还原酶基因克隆及植物表达载体构建.pdfVIP

2009年 10月 甘 肃 农 业 大 学 学 报 第 44卷 第 5期 129～133 JOURNALOFGANSU AGRICULTURAIUNIVERSITY 双 月 刊 蒺藜苜蓿二氢黄酮还原酶基因克隆及 植物表达载体构建 王延秀 ，张金文 ，武禄光 (1．甘肃农业大学农学院，甘肃 兰州 730070；2．昆士兰大学生命学院，澳大利亚 昆士兰 4072) 摘要：采用 RT-PCR方法，从蒺藜苜蓿 (Medicargotrunctula)中克隆T氢黄酮还原酶 (DFR)基因cDNA片段， 并进行DFR基因植物表达载体的构建．结果表明：扩增的DFR基因片段全长约 1000bp，编码 337个氨基酸，与Gen— Bank中已注册的DFR基因核苷酸序列的同源性为99．8OV0．以pBI121为基础载体，构建了CaMV35S启动子驱动的 DFR基因的植物表达载体 pBIDFR，然后导入农杆菌 EHA105，经PCR验证确定构建出植物表达载体． 关键词：蒺藜苜蓿；二氢黄酮还原酶；基因克隆；表达载体 中图分类号：S541．9 文献标识码：A 文章编号：1003—4315(2009)05—0129—05 Cloningandconstructionofplantexpressionvectorofdihydroflavono1 reductasegenefrom M edicargotruncatula WANGYan-xiu ．ZHANGJin-Wen ，WU Lu—guang (1．CollegeofAgronomy，GansuAgriculturalUniversity，Lanzhou730070，China；2CollegeofLife， QueenslandUniversity，Queensland4072，Australia) Abstract：In thisstudy，RT—PCR wasemployedtoclonecDNA fragmentofdihydroflavonolreductase (DFR)geneof1000bpfromMedicargotruncatula；Sequenceanalysisshowedthat99．8V00oftheDFR werehomologoustothoseinGenBank．Andthissequenceencoded337amino-acidresidues．Plantexpres— sionvectornamedpBIDFR wasconstructedbasedonpBI121vector．Moreover，pBIDFRwastransferredin— toAgrobacterium tumefacienEHA105bydirectDNA transfer． Keywords：Medicargotrunctula；dihydroflavonolreductasegenecloning；expressionvector 紫花苜蓿 (MedicagosativaL．)是世界上最著 奶牛 日粮 中添加缩合单宁能防止 以苜蓿青草为主要 名的豆科牧草，具有较高的营养价值，其优质干草中 粗饲料来源时臌胀病 的发生，认为苜蓿叶片中缩合 蛋白质含量达 20V0～22 ，被誉为 “饲草之王”l】J． 单宁 (condensedtannin，CT)含量低是导致反刍牲 但采食或饲喂新鲜苜蓿易引起反刍家畜臌胀病而导 畜臌胀病 的主要原因；Forkmannl6]和 Robbins_7]研 致家畜死亡，造成严重的经济损失_2]，同时也影响 究表 明，二氢黄酮还原酶 (dihydroflavonolreduc— 到紫花苜蓿在放牧方面的利用．Goplen_2和 Jones tase，DFR)是缩合单宁生物合成 中的关键酶；Xie 等Ⅲ研究证实，不引起臌胀病的豆科牧草