管碟法测定粘杆菌素影响因素的探讨.pdfVIP

首届中国兽药大会 中国畜牧兽医学会动物药品学分会2008学术年会论文集 管碟法测定粘杆菌素影响因素的探讨 陈智慧，史梅 (新疆维吾尔自治区兽药饲料监察所，乌鲁木齐830063) [摘要】 管碟法作为抗生素效价测定的经典方法，具有它的优点，但此方法操作步骤复杂，试验 影响因素多，需要从多个环节加以控制。笔者用管碟法测硫酸粘杆菌素时，对试验结果产生影响的 多种因素进行了探讨，以便于提高效价测定结果的准确度。 【关键词] 效价测定；抑茵圈；茵悬液 养基中的营养消耗快，而致使细菌易衰败，从而导 粘杆菌素(colistin)又名多粘杆菌素E(poly— myxinE)，其主要成分为粘杆菌素A和粘杆菌素B致细菌活性降低，所以大肠杆菌的工作用菌要头天 (或粘杆菌素E，和粘杆菌素E：)。粘杆菌素是一接种次日使用，以保证菌体的活性。笔者用新传代 种对多重耐药性革兰氏阴性致病菌具有特效抗菌 的菌与一个月前传代的菌作比较，见表1。菌体的 性的多肽类抗生素。粘杆菌素在临床上常制成盐 活性增强，也就提高了抑菌圈的清晰度及均匀度， 使用，主要为硫酸粘杆菌素可溶性粉和硫酸粘杆菌 即能有效地控制可信限率。 素预混剂二种制剂，兽医l临床所用硫酸粘杆菌素为 表I新传代的与一个月前传代的试验茵对测定结果的比较 其硫酸盐，由于其抗菌作用强、残留低，不易产生耐 药性，中国、美国、欧盟和日本等许多国家批准作为 饲料添加剂或兽药。它广泛用来防治家禽和各类 动物疾病，是最安全畜禽促生长抗菌素之一。 2培养基对效价测定的影响探讨 目前依《兽药质量标准)2003年版和《进口兽 药质量标准》1999年版微生物检定二剂量法测定 培养基的成份多，来源复杂，胨、牛肉浸出粉、 硫酸粘杆菌素及制剂的效价时，常出现抑菌圈直径 酵母浸出粉、琼脂等任何一种成分出现问题，都会 达不到药典所规定的要求或无抑菌圈等现象，影响 导致抑菌圈的异常，特别是琼脂的问题，将会影响 测定结果的准确性。笔者从试验菌、培养基、菌悬 抗生素在琼脂培养基中的扩散速度，最终反映在影 液的加入量、培养时间等方面进行试验探讨： 响抑菌圈大小与清晰度上。这时只要更换其他来 1试验菌对效价测定的影响探讨 源的琼脂，最好是更换进口琼脂，即可解决此问题。 抑菌圈直径达不到药典所规定的要求时，首先 每次更换原材料时，需要作抑菌圈预测试验，以便 应排除菌种变异和染菌可能性。将大肠杆菌 挑选适当的品种使用。培养基有干粉(商品)培养 基和自配培养基两种。干粉(商品)培养基即购买 (44103)三代培养物，接种于营养琼脂斜面培养基 中，次日观察生长良好方可使用，否则则作镜检，观 的半成品干粉培养基，在配制前需调节水的pH值 察菌落形态。试验菌种由于传代次数太多，很容易 呈中性，再按比例加入水中混匀、灭菌，备用。但自 出现变异，均要求有专人负责菌种传代。接种时所 制培养基在配制时，对琼脂的加入量要控制好。试 用培养基应新鲜，无冷凝水则不能使用。用灭菌的 验中发现，琼脂含量应控制在最底限度，即控制在 生理盐水将菌苔洗下，菌悬液应当日使用。由于大 小钢管不下陷为准。这样在加菌层培养基时粘度 肠杆菌繁殖较快，代谢也快，培养时间过长，会使培 适中，不容易结块，摊布均匀，形成的抑菌圈均匀度