育种技术实验.docVIP

实验一 花粉生命力测定 目的 在经过一段时间储藏的花粉或使用远地花粉时,则必须测定,便于杂交成果的分析与研究。通过实验，要求学生掌握花粉生命力测定的方法。 药品及用具 测微尺、显微镜、毛笔、载玻片、盖玻片、恒温箱、玻璃铅笔、蔗糖、蒸馏水、硼酸液、联苯胺、苯酚、酒精、碳酸钠、过氧化氢、琼脂。 方法步骤 方法可分三类：间接法、直接法、染色法。 直接法 原理 将花粉直接在清洁的同种植物的柱头上，并且作好隔离工作，然后观察其雌花之发育，如果胚珠能够正常发育成种子，则说明花粉具有生命力，否则，就没有生命力。 步骤 第一步：将花粉直接授在清洁的同种另一植株花的柱头上，并作好隔离。隔1--3天采集已授过粉的柱头，固定于开水或F.A.A液中。 第二步： 染色剂的配置： 配置1%苯胺兰溶液、配置0.5%苯胺兰乳酸酚。 染色镜检 花柱固定在开水中，并于水中煮烂，而后放在1%苯胺兰水溶液或0.5%苯胺兰乳酚中染色24小时,把花柱撕开,盖上盖玻片,用大姆指轻压。镜检,若花粉具有生命力,即可观察到花粉管伸入柱头组织,若花粉不具生命力,即无花粉管伸入柱头组织. 间接法 原理 借人为创造的特定条件使花粉萌发，鉴定花粉生命力。 硼酸液培养法 配置10、50PPM的硼酸溶液。 用毛笔取少量花粉播入已盛硼酸的清洁小瓶并加盖，放入恒温箱内培养。 取出小瓶充分摇动均匀，用吸管吸一滴于载玻片凹槽内，迅速盖上盖玻片固定花粉粒，然后至于显微镜下观察。 观察2-----4个载玻片，每凹面随机观察5个视野计算发芽率。 染色法 过氧化物酶测定法 原理 这是借助于测定花粉内过氧化氢酶活性强弱来确定花粉生命力的方法，在活的花粉内过氧化氢酶存在，它可以促进过氧化物放氧分解，这些刚被放出来的活性氧容易使还原剂氧化，在本实验中所用的无色的联苯胺和苯酚都是还原剂，但它们被氧化后确表现红色或玫瑰红色，如果花粉是活的，那么这个反应很快，则花粉都被染成红色或玫瑰红色，如果花粉是死的，则这一反应迟迟不能进行，花粉也就保持原色。 步骤 配置药液 配置联苯胺溶液、碳酸钠溶液、过氧化氢溶液 制片 取少量花粉放在悬滴载玻片的凹点内，滴入一滴甲液，置片刻后，再滴一滴乙液，三分钟观察之。 发芽率 在显微镜下观察，凡表现红色或玫瑰红色的，都是有生命力的花粉，黄色的为没有生命力的花粉，计算方法同前。 作业要求 花粉生命力测定结果记载： 花粉名称 花粉采收保存方法 显微镜倍数 绘出花粉发芽形态图 分析花粉发芽率高或低的原因。 实验二 室内切枝杂交 目的 种子小而成熟期短的某些树种可以从树上采下枝条在室内杂交。其好处是便于调整花期；操作、管理和观察记载均较方便。通过本实验，要求学生掌握杨树室内切枝杂交的基本方法。 用具 培养筒、枝剪、纸袋、标签、毛笔、扩大镜、花粉瓶、干燥器等。 方法步骤 1、选择杂交亲本 （1）明确育种任务 如选育速生、材质优良、抗旱、耐寒及耐盐碱。 （2）制定杂交组合 根据育种任务，确定参加杂交的树种及父、母本。 （3）选择亲本植株 选择生长健壮无病虫害的单株作为亲本。 2、雌雄株、花芽与叶芽的识别 杨树属树种都是雌雄异株，因此，在选择杂交亲本时，首先要作植株性别鉴定，同时还要区别叶芽或花芽。 3、枝条的采集与修剪 在已选好的母树上，从树冠中上部剪取直径粗1.5----2.0厘米，长70----100厘米左右并带有花芽的枝条，将采回的枝条，去掉徒长枝和叶芽，雄花枝保留全部花芽，以便收集大量花粉，雌花枝则根据枝条的粗细选留发育最好的花芽3----5个力求保留的花芽均匀地分布在枝条的中上部，其余的全部除去。 在每个花枝上挂一标牌，注明树种名称、采条时间。雌花枝还应记出保留的花芽数。 4、水培管理 上述修剪好的枝条，在水中将基部剪成斜面，以增大枝条的吸水面积，然后插入装有清水的培养筒内。初期室内温度低，可隔一天换一次水。新换水应与原来的水温大致相同，枝条基部常有粘液泌出而影响水分的吸收，应在换水时将其洗去。如果枝条下端的切口已经变色甚至腐烂，则应在换水时，在水中剪去一小段。培养筒的沉淀物，应该经常洗刷。 5、花期调节 为了在雌花开放时有必备的花粉，应注意花期调节，以保证父本开花比母本早数天。如果父本与母本的花期相同，则应将花枝提早3-----5天放入温室。如果雄株花期较晚， 则必须更早些培育雄花枝，或者把雌花枝置于阴凉潮湿处，以促使雄花比雌花先开。 6、隔离 为了达到杂交的预期目的，必须防止非父本的花粉落到母本的柱头上，为此，应在开花前进行隔离。隔离的方法很多，例如把不同杂交组合的枝