川芎嗪对培养人脐静脉内皮细胞基因表达谱影响.pdfVIP

第六次全国中西医结合血瘀证及活血化瘀研究学术大会 ·123· 状显效率达30．9％，总有效率85．5％，与复方丹参组效果(显效率34％；总有效率88％)相似。心 电图好转，显效率12．7％，总有效率46．3％。也与丹参组(分别为14％；88％)相似。心电图改善率 较低，可能由于心肌缺血改善需较长时间才能反映在心电图上。用香青兰后，全血粘度，低切及高 切边率及红细胞压积较治疗前明显降低。表明香青兰有改善与调解血液流变性的作用。用香青兰后 血小板聚集率明显降低，可反映冠心病血小板聚集功能改善，是病情缓解的客观指标。用香青兰后， 性升高(PO．05)，表明该药提高机体抗氧化酶活性，降低机体内过氧化速率，发挥调解体内氧化 与抗氧化的平衡。综上所述，香青兰冲剂治疗冠心病心绞痛具有缓解心绞痛症状，改善心肌缺血， 降低血粘度，血小板聚集率，抗脂质过氧化损伤及轻度降低胆固醇作用，是一味有效治疗心绞痛的 药物。 川芎嗪对培养人脐静脉内皮细胞基因表达谱的影响 吴红金1 吕俊萍2马增春2王升启2 l、北京中医药大学附属中西医结合医院2、军事医学科学院放射医学研究所 川芎味辛性温，功能为活血祛瘀、行气开郁、祛风止痛，《本草纲目》谓其为：“血中气药”。 川 芎嗪是川芎的有效成分四甲基吡嗪，具有扩张微血管、改善微循环、降低血黏度、改善血液流变学、 降低毛细血管通透性、调节血小板功能和抗凝等作用，在防治心脑血管疾病等方面具有重要的临床用 途。DNA芯片技术是近年来发展起来的能够同时监测大量基因的相对表达的一项新技术，随着该技 术的发展，寡核苷酸芯片越来越广泛的应用于基因表达谱的研究。寡核苷酸芯片技术平台已作为研 究基因表达的有力而可靠的工具t4]本研究应用此芯片技术研究了川芎嗪对培养人脐静脉内皮细胞 cells (humanumbilicalveinendothelialHUVEC)基因表达谱的影响。从分子水平探讨川芎嗪的作用 机制。 1．材料与方法 1．1药品和试剂川芎嗪为中国药品与生物制品检定所的标准品；I型胶原酶购自Sigma公司；TRlzol II。M反转录试剂盒购自Gibco公司；Rnasin核酸酶 试剂和M199培养液购自Gibeo公司。Superscript 剂。 1．2细胞培养 人脐静脉内皮细胞培养方法参见Jaffe方法的改进法。 2．3细胞的处理 血清M199培养液，培养液中含有川芎嗪(40微克／毫升)。继续培养24小时后，收集每孔的培养液， 用于寡核苷酸芯片分析。 1．4寡核苷酸芯片的制各 1．4．1心血管寡核苷酸芯片的设计待检测基因的选择以及芯片的设计和质量控制见文献。 1．4．2探针的合成与点样 寡核苷酸探针合成在PE8909DNA合成仪上完成，采用标准亚磷酰氨化学方法，探针5’氨基修饰 用N，MMTr-6．氨已基．2．氰乙基．N’，N’．二异丙基亚磷酰氨(自制)，在合成后的最后～步引入。合成完 ·124· 第六次全国中西医结合血瘀证及活血化瘀研究学术大会 L溶解于3× 毕后浓氨水55。C脱保护／切割15h，OPC柱(PE公司)纯化。寡核苷酸探针以O．5p∥|I SSC溶液中，用PixSys 别用0．2％SDS和水处理玻片，凉干备用。 1．5}玎ⅣEC总RNA的提取 紫外分析结合甲醛变性电泳分析总RNA的纯度和完整性。 1．6荧光标记eDNA探针的制备 la 反转录荧光标记eDNA的方法参见文献。每一个反应需要50—100g总RNA，同时加入0．3|lg 体外转录的萤火虫荧光素酶的mRNA作为阳性对照，对反转录和杂交过程进行监控以及对结果进行 定量分析。 本研究采用三批细胞重复标记三次，每次标记都采用了荧光交换标记法。 1．7杂交与洗涤 混合来自两组细胞的cDNA荧光探针，杂交与洗涤方法参见文献。 1．8扫描与分析 4．0软件进行数据分析和归一化处理，