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其它研究
释法细胞克隆.后一。种方法由于费时费力,因此第一。种方法被广泛采用。流式细胞术检测原理
是用荧光标记的抗体与靶细胞上至少一种GPJ锚定蛋白结合,同时采用另外方案标记靶细胞。当
发生突变时,不具有GPI锚定蛋白的靶细胞比例增加。不同物种问GPI锚的合成高度保守,而且
多种细胞都能合成GPl锚,因此Pig.a基因突变试验适合检测不同物种和组织的突变,但实际上
目前Pig.a基因突变试验仅采用外周血细胞、红细胞、白细胞或骨髓细胞。这是因为处理实体组
织时很难获得完整表面的足够数量的单细胞。此外,一些细胞如上皮细胞具有很强的自身荧光,
这也给检测实体组织带来干扰。
3.试验的灵敏性和特异性
目前的研究结果表明Pig.a基因突变试验具有良好的灵敏性和特异性。用大鼠开展的Pig.a
低于5×10而,这与淋巴细胞和多种细胞系X染色体的Hprt基因突变率相近,并显著低于大多数转
基因细胞的突变率。前期实验还用啮齿类动物外周血考察了部分致突变物以及非致突变物的遗
传毒性,结果致突变物均是阳性,非致突变物均是阴性。此外,N.乙基,N.亚硝基脲(ENU)能
基因突变率具有相似的量效曲线。除了以上特点外,暴露后引起的RET和RBC突变可长期存在,
致突变物可蓄积性诱导突变,且少量血液就能满足检测,这使得该试验很适合结合在亚慢性和
慢性毒性试验中开展。
目前Pig-A基因突变试验的相关数据较少,还需要进一步完善实验方法并在不同实验室之
间验证其灵敏性和准确性。针对于此,已经有17个研究团队采用统一的试剂和试验方案进行
Pig-a基因突变试验,欧洲环境突变学会(EMS)成立了Pig.a基因突变试验工作组。随着法规毒
理试验关注点从简单的毒性特征到体内反应情况的转变以及研究的深入,相信Pig-A基因突变
试验很可能成为新的法规毒理试验。
大骨节病特异基因、蛋白的筛选及生物填充
疗法疗效的研究进展
郭雄
西安交通大学医学院公共卫生系、环境与疾病相关基因教育部重点实验室、
卫生部微量元素地方病重点实验室,陕西西安,71006l
大骨节病(Kashin-BeckDisease,KBD)是一种以损害儿童发育过程中软骨内化骨型的透
明软骨(骺软骨、骺板软骨和关节软骨)并导致软骨内化骨障碍的地方性、慢性变形性骨关节
病。纵观160余年的大骨节病研究历史,国内外学者对本病的流行规律、临床、放射线与病理
学诊断、环境致病因素及其预防措施,取得了许多创新性研究成果,但在环境可疑致病因素在
体内如何选择性地损害活体的成熟期软骨细胞及其特异性基因、蛋白缺乏充分的证据。为此,
近年来在国家自然科学基金和“十一五”国家科技支撑计划的资助下,进一步深入到分子生物
学水平拓展研究大骨节病软骨损伤的发病机制,紧密围绕引起软骨深层细胞坏死的特异性致病
因素,从环境因素、软骨损害的生物标志物及其动物模型、环境一基因相互作用等方面进行探索,
以推进我国防治大骨节病的进程。
1、大骨节病软骨损伤的特异基因与蛋白筛选研究进展
从环境因素、人群、个体、器官、组织细胞水平向软骨细胞分化、细胞外基质蛋白和大分
子及其调控因子、基因发展已是目前大骨节病软骨损伤机制研究的一个重要方向,以查寻环境
179
其它研究
致病因子如何选择性地损伤人活体内成熟期软骨细胞的关键环节。
1.1大骨节病软骨细胞分化及调控基因的研究 大骨节病除经典的深层软骨细胞坏死等病变
外,还发现有软骨细胞“去分化”、胶原表型、甲状旁腺激素相关肽(PTHrP)、TGF-t3、bFGF、
VEGF的表达异常,表明大骨节病的发生不但涉及软骨内化骨障碍还涉及软骨细胞终末分化障碍。
其特点为:软骨表层发生软骨细胞的“去分化”,以II型胶原合成减少和新合成I和Ⅲ型胶原为
特点,类似于纤维母细胞的表型,与既往用病区粮、水饲养小鼠中软骨基质中I型胶原增多,
I型/Il型胶原之比增加相一致。软骨细胞终末分化障碍主要表现一。为患病儿童深层软骨细胞坏
死增多,X型胶原合成减少;二为晚期成人大骨节病软骨X型胶原表达呈增加趋势,软骨细胞
hormone-related
过早肥大。其次,大骨节病软骨甲状旁腺激素相关肽(parathyroid peptid
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