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利用GUS基因表达观察启动子功能
实验报告
时间:2011.5.10
【摘要】
[目的了解。方法MS培养基上培养一周多的植株取10株左右转移到含有200mmol?L-1NaCl的培养基上相同条件下培养16小时,剩下一半原条件继续培养。
3.GUS染色
(1)取8支1.5ml离心管,各加入1mL 1mol/L GUS染色液。
(2)将培养好的四种启动子缺失突变体用无菌水冲洗干净,用吸水纸吸干,用镊子各夹取几根,放入EP管中。
(3)用37℃保温并染色8h。
(4)倒掉染色液,转入70%乙醇中脱色,去除叶绿素。
(5)显微镜下观察,白色背景上的蓝色小点即为GUS基因表达的位点。
【实验结果】
图 1 PT1、PT2、PT7、PT8拟南芥染色情况(“S”表示经盐处理)
图 2 PT1(右)PT2(左)
图 3 PT2(右)PT7(左)
图 4 根 PT7(右)PT8(左)
图 5 PT7(右)PT8(左)
图 6 PT1(右) PT1盐处理(左)
图 7 PT2(右)PT2盐处理(左)
图 8 PT7(左)PT7盐处理(右)
图 9 叶 PT8(右)PT8盐处理(左)
图 10 PT8(右)PT8盐处理(左)
【分析讨论】
由照片可观察到,PT1、PT2染色深浅对比明显,而PT2与PT7,PT7与PT8之间则对比相对不明显,说明PT2比PT1缺少的800多bp启动子序列中含有启动子关键序列。
而从PT1、PT2、PT7、PT8的盐处理前后照片可以观察到,PT1、PT2、PT7经盐处理后颜色明显变深,而PT8无明显变化,说明PT8比PT7缺少的100多bp序列中含有与盐诱导相关的关键序列。
【参考文献】
[1] 韩晓宇,宋铭,等.用GUS基因表达观察启动子功能
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