补肾益气方调节合体滋养细胞吲哚胺2，3-二氧化酶表达与活性对母胎界面Th细胞因子的影响.pdfVIP

全国中西医结合生殖健康学术研讨会 补肾益气方调节合体滋养细胞吲哚胺2，3一二氧化酶 表达和活性对母胎界面Th细胞因子I；蚴 李雪莲归绥琪王海燕复旦大学附属妇产科医院 自然流产病因复杂，其中内分泌和免疫调节异常占80％．94％。目前，胎儿作为同种移植抗原 而不被排斥的研究已深入到母胎界面滋养细胞与淋巴细胞的免疫关系，大量研究表明Th细胞因子平 衡在正常妊娠维持中起重要作用。吲哚胺2，3-氧化酶(indoleamine 代谢酶，主要存在于淋巴器官的抗原提呈细胞及孕期的合体滋养细胞和巨噬细胞，通过降解色氨酸 生成犬尿氨酸而抑制T细胞活性，在调节母胎界面Th细胞因子平衡中可能有重要作用。我院以往的实 平，为进一步研究此方对母胎免疫的调节作用，探讨其保胎机制，本实验研究此方调节离体培养的 人合体滋养细胞IDO表达和活性对母胎界面Th细胞因子平衡的影响。 材料与方法 组织来源 绒毛和蜕膜组织来自复旦大学妇产科医院行人工流产的早孕妇女。 实验动物 选择体重200±10克的12～14周龄雌性sD大鼠，清清级饲养。 试剂 DNA 酯(DEPC)(Genview分装)、DGL2000 型ABC组化检测试剂盒(华美生物)、RNAex FirstStrandcDNA DNA SynthesisKit(Fermentas)、Taq APWestern 博彩生物科技)、Visual BlottingReagentSet(AbMinus)SNBC、HumanIFN一1、IL一10 ELISA检测试剂盒(RD)、MouseT anti—CD3(Human 序列，采用primerpremier B—actin： 3’，产物361bp， sense：5’GAGCGGGAAA 3’，产物240bp) 仪器设备 UNICOTM UV一2102C型紫外可见分光光度计、PerkinelmerDNAThermal 130 论文及摘要集·大会交游 X (ZORBAXC18250mm4．6mm 2996型PDA检测器。 5斗m)、Waters ‘ 中药血清和对照血清的制备 采用我院临床保胎经验方——补肾益气方，由中科院上海药物研究所对党参、菟丝子、白术、 腹腔注射麻醉，腹主动脉取血，分离血清，分装后一20。C保存备用。 ’ 胰酶、5mg／mlDNase—I溶液37。(2消化5分钟X X 的DMEM培养基，以1—5 形蛋白一，角蛋白+，hCG—B+)。 蜕膜T淋巴细胞分离、培养、鉴定 l。5X 定细胞后采用ABC法进行免疫细胞化学鉴定(CD3+)。 ．． 合体滋养细胞与蜕膜T淋巴细胞共培养 mRNA或蛋白质，一700C保存，收集细胞培养上清液，一20。C保存。 。 RT—PCR检测合体滋养细胞IDOmRNA表达 按RNAex FirstStrandcDNA Kit说明书操作获得RT产物。PCR反应 Reagent、RevertAidTM Synthesis