表达犬细小病毒VP2基因的重组狂犬病病毒生物学特性探究.pdfVIP

表达犬细小病毒VP2基因的重组狂犬病病毒生物学特性研究 施赫赫，牛学锋，刘祥茵，黄永亮，阳佑天，罗永文， 林颖仪，刘慧思，郭霄峰 (华南农业大学兽医学院，广州，510642) 摘要：目的研究表达犬细小病毒VP2基因的重组狂犬病病毒生物学特性。方法将本课题组构建成功的重组狂犬病病 3．0相比较生 病病毒抗体与抗犬细小病毒抗体水平，用狂犬病标准攻毒毒株CVS-11进行攻毒保护试验小鼠可获得80jl以上的存活率。结论 疫苗的研制莫定了基础． 关键词：狂犬病病毒；犬细小病毒VP2基因；重组；生物学特性 兽共患病u1，在全球100多个国家和地区均有发生，99％的人间狂犬病来自病犬。人感染后一旦出现临床 症状，几乎100％死亡憧。。狂犬病病毒基因组长约12kb，结构基因从5’一3’端依次为N、P、M、G和L， 分别编码核蛋白、磷蛋白、基质蛋白、糖蛋白和转录酶大蛋白。其中由G基因编码的糖蛋白是狂犬病毒的 主要保护性抗原，能刺激机体产生中和抗体，保护机体抵抗病毒的感染瞄1。 另一种高传染性和高致病性的疾病是犬细小病毒性肠炎，可引起成年犬严重胃肠炎和幼犬心肌炎。犬 物，只在衣壳装配和病毒基因组包装后才出现∞1。与同属的其他病毒如猪细小病毒(PPV)、水貂细小病毒 抗原蛋白。CPV对犬危害极大，预防CPV对犬只的生命和健康具有重大意义。 反向遗传学技术(reversegenetic of 术，通常也被称为“病毒拯救(therescuevirus)”。反向遗传学技术是通过构建RNA病毒的感染 性分子克隆，在DNA分子水平上对其进行体外操作，从而研究病毒结构与功能的方法¨¨。反向遗传操作技 术在表达外源基因，寻找新型疫苗载体方面显示了非常好的前景。负链RNA病毒不具有DNA相，因此不会把 其基因组信息整合进宿主细胞，在安全性上具有很大优势u“。 SPBNGA-Cyto 4|。Zhen SPBNGAS-GAS具有与V—RG株同样的保护率，但SPBNGAS-GAS株可免疫的动物范围更广uF．Fu的实 a(CCL3)的重组狂犬病病毒，不仅该病毒的致病性降低， 验室研究发现，BALB／c小鼠肌内注射表达MIP—l 通讯作者：郭霄峰，华南农业大学兽医学院，E．mail：xfguo@scau．edu．cn 一313— 第四届中国兽药大会——兽医微生物学、兽医生物制品学学术论坛论文集(2012年) 而且可通过将树突状细胞和B细胞重新聚集到注射部位、淋巴结和周围血中提高其免疫原性u别；此外，表 达树突状细胞活化分子的狂犬病病毒免疫小鼠后与亲本株相比可提高其内源性和适应性的免疫反应，并可 gag的重组狂犬病病毒疫苗免疫小鼠后可刺 抵挡颅内注射的病毒攻击n引。Celestine等研究发现表达HIV—l 7|。Waleed 激产生HIV一1gag特异性的免疫反应n Mustafa等研究发现表达肉毒杆菌神经毒素的非毒性HC50 domain的狂犬病毒免疫小鼠能诱导强烈的免疫反应，可抵抗高剂量的肉毒杆菌神经毒素攻击u…。以上研究 均验证了狂犬病病毒作为优良病毒载体，可刺激机体获得高水平的特异性免疫保护。 锋博士拯救获得n引，在其研究基础上，本研究对重组病毒的生物学特性进行比较，为以狂犬病病毒为载体 表达多个外源基因的动物多联基因工程疫苗提供研究基础。 1材料与方法 1．1 毒株、细胞株狂犬病病毒rHEP—Flury rHEP-Flury(dG．vP2)株、狂犬病病毒CVS—II株及BSR细胞株由本科研小组保存。 1．2工具酶及试剂RNA提取试剂TrizolLS购自广州英韦创津生物有限公司：TraAce鼠源反转录酶、 抑制剂(Ribonuclease DNA聚合 根生物