去卵巢致肾虚的腰椎间盘退变模型的实验研究.pdfVIP

中国骨伤 2013年 12月第 26卷第 l2期 ChinaJO~hopTrauma，Dec．2013，Vo1．26，No．12 ·1015· · 基 础 研 究 · 去卵巢致肾虚的腰椎间盘退变模型的实验研究 姚长风 。，赵永见 ，牛凯 ，孙悦礼 ，李晨光 ，唐德志 ，一，舒冰 -一，卢盛 -一，周重建 ．一，梁倩倩 -，一， 施杞 ，王拥军 (1．上海中医药大学附属龙华医院，上海 200032；2．上海中医药大学脊柱病研究所，上海 200032；3．安徽中医学院 针灸骨伤临床学院，安徽 合肥 230038；4．安徽理工大学医学院，安徽 淮南 232001) 【摘要】 目的：观察去前肢卵巢对大 鼠腰椎 问盘和椎体骨密度的影响，建立大鼠肾虚型腰椎间盘退变模型，探讨 椎 间盘退变的 内在机制、椎 间盘退变和骨质疏松之间的关系。方法 ：选择 1月龄雌性 SD大鼠30只，随机分为正常对 照组、腰椎 间盘退变组 、肾虚型腰椎 间盘退变组 (复合模型组)，每组 lO只 。腰椎 间盘退变组大鼠去除双前肢 ，肾虚型 腰椎 间盘退变组大鼠在去除双前肢 3个月后 ，再去除双卵巢。8个月后 ，通过 Micro—CT扫描观察椎体骨密度 ，藏红 0一 快绿染色法观测椎 间盘组织形态学改变，免疫组织化学法观察 Ⅱ、X胶原在椎 间盘 中的蛋 白表达，实时荧光定量聚合 酶链式反应 (real—timepolymerasechainreaction，RT-PCR)法检测细胞外基质相关基 因的表达 ，以评价去除双前肢和双 卵巢对椎 间盘退变和椎体骨密度的影响。结果 ：Micro—CT扫描发现 ，肾虚型腰椎 间盘退变组动物椎体骨质疏松 明显 ； 藏红 0一快绿染色法显示椎 间隙变窄，肾虚型腰椎 间盘退变组椎 间盘组织退变明显 ，软骨板发育不全 ；免疫组织化学染 色显示肾虚型腰椎间盘退变组相对于正常对照组，椎间盘 内X型胶原表达增加，Ⅱ型胶原表达降低；RT—PCR分析发 现 ，腰椎 间盘退变组和 肾虚型腰椎 间盘退变组 Ⅱ型胶原 (typeⅡcollagen，Col2a1)基 因的表达较正常对照组低 ．3组比 较差异有统计学意义 ( O．000，P=0．000)；腰椎间盘退变组和 肾虚型腰椎 间盘退变组聚集蛋 白聚糖 (aggrecan一1，Agc1) 基因的表达较正常对照组低，差异有统计学意义 (P=0．000，P=O．000)；腰椎间盘退变组和肾虚型腰椎间盘退变组X型 胶原 (typeXcollagen，Coll0a1)基因的表达较正常对照组高，差异无统计学意义；肾虚型腰椎间盘退变组基质金属蛋 白 酶-13(matrixmetalloproteinase13，MMP～13)基因的表达较正常对照组和腰椎间盘退变组高，3组比较差异有统计学 意义 ( 0．000， 0．oo0)；腰椎 间盘退变组和 肾虚型腰椎 间盘退变组聚集蛋 白聚糖降解酶 2(aggrecanase一2，ADAMTS一 5)基 因的表达较正常对照组高，差异有统计学意义( 0．006，P=-0．008)。结论 ：采用去双前肢和去卵巢的方式建立的大 鼠腰椎 间盘退变模型，出现 了肾虚 “骨象”——骨质疏松 ，并在组织形态学、分子细胞生物学等方面的表现与临床 肾虚 型腰椎 间盘退 变更加相似。 【关键词】 腰椎； 椎间盘； 卵巢； 大鼠； Sprague—Dawley DoI：10．3969~．issn．1003—0034．2013．12．011 Experimentalstudy on lumbarintervetebraldiscdegeneration modelwithkidney deficiencybyovariectomizing YA0Chang-feng，ZHA0Yong-jian，NIUKai，SUNYne-li，LIChen-guang，TANGDe-zhi，SHUBing，LUSheng，ZHOUChong- 帆 ，LIANGQina—qian，SHIQi，andWANGYong-jun．Instituteof ine，LonghuaHospital，ShnaghaiUniversityofTrandi— tionalChineseMedicine，Shnaghai 200032，China ABSTRACT Objective：Toobserveeffectsof