昆虫和哺乳动物蛋白质N-糖基化修饰异同的比较及其潜在的应用意义.pdfVIP

国蚕学会第七届青年学术研讨会论文集 昆虫与哺乳动物蛋白质N-糖基化修饰异同的比较及其潜在的应用意义 韦亚东1,2 牛淼淼1 刘子瑜1 车凤玉1 张国政1,2 1 2 （江苏科技大学， 国农业科学院蚕业研究所 江苏镇江 212018） 摘 要 昆虫杆状病毒表达系统是一个研究背景比较清楚、应用范围比较广泛的真核表达 系统，能够对表达的重组蛋白质进行如糖基化等的翻译后修饰。目前人们的研究结果表明， 昆虫的蛋白质糖基化过程要比高等动物简单的多，但昆虫能够以严格的方式表达一些功能 化的糖蛋白。基于过去多年来所积累的关于昆虫蛋白质糖基化修饰的研究成果，本文对昆 虫与哺乳动物的蛋白质 N-糖基化修饰途径和分子机制的异同进行比较分析，同时本文也 进一步讨论如何在前期人们的研究基础上，对昆虫杆状病毒表达系统的蛋白质糖基化修饰 途径做些改造性工作，以期能够直接利用该昆虫杆状病毒表达系统生产人源化糖蛋白。 关键词 昆虫；杆状病毒；表达系统；N-糖基化修饰；人源化糖蛋白 [1] 自20 世纪80 年代以来，昆虫杆状病毒表达系统得到迅速的研究并表达了大量的重组蛋白 。 该表达系统包括作为表达载体的重组病毒和作为病毒繁殖宿主的昆虫细胞或虫体，外源基因的表达 是利用重组病毒非常强的病毒晚期基因启动子，如polyhedrin 或p10 等，协同病毒转录复合体完成 [2] 的 。基于该表达系统除了能够以非常高的水平表达外源基因外，还能够容纳很大的外源基因的插 [3] 入表达，是一个很好的表达多亚基功能蛋白的平台 。同时对人或动物具有相对的生物安全性。因 [4] 此，人们逐渐把它作为基因治疗及应用该系统将外源基因引入哺乳动物细胞或组织的重要工具 。 在昆虫杆状病毒表达 ，当病毒载体进入宿主细胞，宿主自身的基因表达基本上全面停止，细 胞内的蛋白质合成系统转向合成表达病毒基因，包括插入的外源基因。作为杆状病毒宿主的昆虫是 真核生物，细胞能够以多种复杂方式对合成的蛋白质进行后修饰，表达的重组蛋白在细胞内被折叠、 [5] 修饰、运输组装成最终的功能蛋白 。其 ，N-糖基化是蛋白质翻译后修饰 非常重要的一种，与 蛋白质的正确折叠、生物半衰期及生物功能正常发挥息息相关。目前的研究结果表明，昆虫的糖基 [6] 化修饰和高等动物的不同 。哺乳动物的糖蛋白是具有唾液酸末端的杂合型 N-糖链构型，而昆虫细 [7] 胞表达的糖蛋白糖链具有非常简单的侧链，是低甘露糖型，并且含有对人类具有过敏反应 的核心 α-1，3 连接的岩藻糖。这些糖链结构的差异，极大限制了昆虫杆状病毒表达系统人类医药上的应 用。 目前有很多研究策略正在试图解决这个问题。一是改变昆虫细胞的培养液配方组成，使其能够 [8] 在新的营养生长条件下，生产出具有复合型糖链的糖蛋白 。另一个是发展其它能够替代现在的杆 232 国蚕学会第七届青年学术研讨会论文集 [9] 状病毒表达系统