利用同源转基因技术培育氮高效利用转基因水稻.pdfVIP

浙江农业学报ActaAgricuhuraeZhefiangensis，2011，23(5)：862—869 http：／／www．zjnyxb．cn 王虹玲，阚国仕，李珊珊，等．利用同源转基因技术培育氮高效利用转基因水稻[J]．浙江农业学报，2011，23(5)：862—869． 利用同源转基因技术培育氮高效利用转基因水稻 王虹玲 ，阚国仕 ，李珊珊 ，马小路 ，贾士荣 ，刘昱辉 ， (沈阳农业大学 生物科学技术学院，辽宁 沈阳 110161； 中国农业科学院 生物技术研究所，北京 100081) 摘 要：为了提高水稻对氮素的吸收利用率 ，培育不含任何标记基因、报告基因和载体骨架序列的转基因水 稻，从硅藻中克隆了硝酸盐转运蛋白(DiatomNitrateTranspo~er，NAT)基因，构建了3个植物表达载体：可使 NAT在水稻中高效表达但无抗性筛选标记基因的植物表达载体 pANW2300K一、带有负选择标记一大肠杆菌 胞嘧啶脱氨酶 的正负筛选植物表达载体 pCodA1301和植物表达载体pIptl21。明确 Ot基因可显著抑制 转基因烟草的生长发育，但对水稻的影响较小；建立了以短暂选择和正负筛选为基础的水稻同源转基因技 术 ；获得了 l8株有 目标基因NAT，但不含仟何筛选标记基因和载体的骨架序列的转基因水稻植株，转化率达 27．7％；实现了同源转荩 冈技术在水稻中的应用 ，这在国内尚属首例 。 关键词：水稻；同源转基因技术；短暂选择万法；正负筛选；NAT 中图分类号：S511 文献标志码：A 文章编号：1004—1524(2011)05—0862—08 Breedingofhigheffi cientnitrogenutilizationtransgenicricethroughintragenesistechnology WANG Hong—ling’，。 KAN Guo—shi，LIShan—shan ，MA Xiao—lu ，JIA Shi—rong ，LIUYu．hui ， (BiotechnologyDepartment，ShenyangAgriculturalUniversity，Shenyang110161，China；BiotechnologyResearch Institute，ChineseAcadem)，ofAgriculturalSciences，Bering100081，China) Abstract：Inordertoimproverice’Snitrogenabsorptionrate，marker—free，reporter—freeandbackbone—freetransgen— icrice，(NitrateTransporter，M 7．)wasclonedfromdiatom genome，andthreeplantexpressionvectorswerecon— strueted：marker—freeplantexpressingvectorpANW2300K—whichmakesitpossiblefordiatom nitratetransporter— NATgenetobehighlyexpressedinrice，positive—negativeplantexpressingvectorpCodA1301whichcarriesanega— tiveselectablemarker—CodAandtheplantexpressingvectorpIptl21．Throughthesevectorsweprovedthat／ptgene can inhibitthegrowthoftobacco，whilehavinglittleeffectonrice．W ealsoestablishedatransgenicsystem basedon transientselectionandpositive—negativeselection．Eighteenmarker—freeandbackbone—rfeericeplantsexpressingthe targetgeneNATwereidentifiedtobetransg