四株NDV分离株F基因的克隆和序列分析.pdfVIP

1042 2004学术年会 0 四株NDV分离株F基因的克隆与序列分析 沈志强，管宇，刘吉山，李峰，吴信明 赵舐王艳，徐守振，鲍卫超，王辉暖 山东省畜禽用蜂胶疫苗研究开发推广中“ 山东省滨州畜牧兽医研究所，滨州256600 1 引言与目的 自1926年首次暴发于印度尼西亚的爪哇和英国的新城以来，新城疫曾经有过三次人规模流行， 目前该病已经传播到全世界的许多国家和地区，一直是严重危害养鸡业发展的主要禽病之 。”’目 前防治新城疫的有效方法仍是疫苗接种，然而疫苗接种仅仅控制了新城疫的大规模流行，免疫鸡群 t{l仍时有疫病发生。为了从根本上防制和根除新城疫，对其病原的研究已成为了热点。新城疫疾病 的研究随着分子生物学的飞速发展，目前已经不仅仅局限于传统的生物学特性的研究，而目从分子 生物学的角度，己将新城疫病原细分为多种基因亚型，据此我们对山东省流行的新城疫4株NDV分 离株F基因的克隆与序列分析进行了研究，鉴定了其毒力强弱、进化地位并确定了基因型，为研究 我国新城疫分子流行病学特征和制定综合防治措施提供依据。 2材料与方法 2．1材料： 株与质粒载体(1)受体菌E 公司。引物由TaKaRa生物公司大连分公司合成。试剂与溶液配制按常规配制。 2．2方法： 空斑纯化试验、纯化病毒的扩增按常规进行。病毒的F基因的克隆与测序：将NDV病 毒按最佳稀释浓度，接种于10日龄SPF鸡胚，直至鸡胚死亡后无菌收取尿囊液。测定其病 毒效价，采用透析袋浓缩法将病毒浓缩50倍。利用蛋白酶K法提取sdbz．s99分离株的基因 反应：ddH20 各2ul；Temp 混匀后进行下列循环反应： 98℃10s； 20ul；Taq酶0．5ul，共计100ul。 35 72 55℃30s：72℃90s oC Cycles 化大肠杆菌。利用全自动DNA测序仪进行核苷酸序列测序。序列比较分析：从NCBI网站 软件进行核苷酸序列、氨基酸序列比较分析。系统发育树的建立：应用DNAStar软件包巾 MegAlign软件，计算遗传距离(Jotun 绘制系统发育进化树。 3主要结果与结论 对4株具有一定代表性的NDV分离株的F基因进行RT—PCR扩增和序列分析，根据基因裂解 2004学术年会蟋》1043 位点的氨基酸序列推测，其中1株属于弱毒株，3株属于强毒株；核苷酸序列及其推导的氨基酸序 5．6％．88 型NDV强毒株同源性在86 9％．87．O％ 3％之间，推导的氨基酸序列同源性与Clone一30株在85 进化树，其结果表明，3株分离强毒株为VII基因型，弱毒株为基因Ⅱ型。 关键词：NDV、F基因、RT—PCR、克隆、序列分析 参考文献(略) 鸡缩胆囊素四串联体的构建、原核表达及免疫原性研究 舒鼎铭，覃健萍，马现永，马静云，曹永长，毕英佐 华南农业大学动物科学学院，广东广州510642 在现代高度集约化的生产条件下，动物采食量不足已成为一个普遍现象，若要提高动物的生产 性能，首要的也是最有效的方法就是提高动物的采食量。缩胆囊素(CCK)是一种调节动物采食量 经有许多研究证实，CCK可以降低许多种动物的采食量，如猪和人。鉴于CCK具有抑制采食的特 性，本研究根据己发表的鸡CCK基因的碱基序列和大肠杆菌高频密码子合成CCK基因，利用同尾 酶构建CCK·33基因四串联体并进行表达，以纯化的表达蛋白此为免疫原主动免疫动物，研究CCK 蛋白的免疫原性，为下一步的研究应用工作奠定基础。 1材料与方法 pRSETA质粒与DH 司。广东省农业科学院畜牧研究所岭南黄胡须鸡E2系，均为母鸡。 和c2扩增CCK-33基因片段。将其连接至pRSET 低剂量两种油佐剂疫苗免疫360只胡须肉鸡，共免疫三次。称重并统计耗料量，计算全期的平均增重、 平均采食量和料肉比。采血制备血清，用ELISA法测定抗体水平。测定胆囊长、宽、高，计算胆囊发 育指数、胆囊体重指数、胰腺发育指数。采用SPSS(