绵羊受精素β基因mRNA在绵羊睾丸组织中表达.pdfVIP

中国畜牧兽医学会动物繁殖学分会第十三届学术研讨会论文集 绵羊受精素13基因mRNA在绵羊睾丸组织中的表达 娜仁花1’2、。旭日干2 1．内蒙古农业大学动物科学与医学学院，呼和浩特市010018； 2．哺乳动物生殖生物学与生物技术教育部重点实验室， 内蒙古大学生命科学学院实验动物研究中心，呼和浩特市010021 摘要： 利用RT—PCR法和原位杂交技术，研究受精素DmRNA在睾丸和附睾中的表达特征。结果 显示，受精素pmRNA只有在睾丸组织中表达，并且主要分布在精细管上皮圆形精细胞中，而附睾 不同部位均无表达。上述结果表明，受精素pmRNA是睾丸特异性表达的精子膜蛋白。 关键词：受精素D；RT—PCR；原位杂交；绵羊 受精素B(fertilinB)是在筛选一组针对豚鼠精子表面分子的单抗时发现的一种类似蛇毒 的糖蛋白H1。研究显示，该组抗体中的一部分能与精子头后部区域结合，而此区域正是精卵融合的 特定部位，其中一种单抗PH-30能够抑制豚鼠无透明带卵细胞与精子结合幢1，而这一受精素B就是 作为被单抗PH一30识别的抗原被发现的。动物实验证明，受精素8参与精卵结合和融合∞¨引，且特 eDNA 异位于睾丸哺1。最近的研究表明，剔除受精素B基因的小鼠精子，无法进行受精哺1。受精素B 全序列在小鼠、大鼠、豚鼠、兔、猪、牛、猴及人类已经完成克隆。目前，对于绵羊的受精素0国 内外尚无研究报道。为了了解绵羊受精素B在睾丸和精子上的分布情况，以便研究其蛋白功能及受 精过程中的作用机制，本研究根据牛、猪、人、黑猩猩受精素BeDNA的保守序列设计了一对引物， 睾丸和附睾中的表达。根据在其它动物上的研究结果，受精素B在睾丸中特异表达，所以我们首先 选择公羊的睾丸作为实验材料来检测受精素B的表达。 1材料与方法 1．1材料 ‘ 1．1．1试验动物及其组织 成年公羊6只，由呼和浩特市回民屠宰场提供。公羊屠宰后立即采集其睾丸组织和附睾头部、 体部及尾部组织，放入已处理过的冻存管后投入液氮中备用。 1-1．2主要仪器设备及试剂 高速低温离心机、PCR仪、振荡器、气浴培养摇床、凝胶成像系统、紫外一可见光分光光度计、 倒置相差显微镜、Leica手摇切片机、原位杂交专用栽玻片和盖玻片。 DNAMarker DL2000、PrimixTag、ReverseTranscriptaseXL(AMv)、限制性内切酶EcoR工， 琼脂糖凝胶DNA回收试剂盒、T4DNA连接酶、oligod(T)坩、RibonucleaseInhibito购于大连宝生 Vector、DNAMarkerIII购买 物公司，Trizol购自美国Invitrogen公司，TOPIO感受态、pGM-T 于北京天为时代科技有限公司，地高辛RNA标记试剂盒、地高辛核酸检测试剂盒均购自Roche公司， 甲酰胺、鲑鱼精子DNA、葡聚糖硫酸钠、Ficoll400、聚乙烯吡咯烷酮、BSA、蛋白酶K为Sigma公 司产品。 1．2．3PCR引物设计及合成 Star (Lasergene5．01)进行基因序列的同源性比较，得出上述四种动物eDNA序列的保守区，根据该保 下游引物5’一ACGGATGCCCATCCTG从CATACA一3’，目的DNA片段预期大小为448bp，绵羊B--actin 基金项目：国家自然科学基金和内蒙古自然科学基金(200408020412) 联系人电子邮箱：narenhua68@…163com，联系电话：0471--4309195 作者简介：娜仁花(1968一)，女，呼和浩特市人，博士，副教授，硕士研究生导师。 622 中国畜牧兽医学会动物繁殖学分会第十三届学术研讨会论文集