转化生长因子-β基因多态性和尘肺易感性.pdfVIP

转化生长因子一6基因多态性与尘肺易感性 范雪云’李娟朱壮春白玉萍姚三巧李翠兰张淑杰 流行病学调查发现，在同～工作环境、接尘时间相同的个体并不都患尘肺，而且患病的不同个体． 其严重程度也存在着很大的差异，这些均提示尘肺的发生发展除了与环境因素有关外，与个体易感性密 切相关“3。近年个体遗传易感因素在尘肺发病中的作用越来越受到人们的关注，研究者试图从遗传学角 度探讨敏感的检测指标，及早识别高危人群，避免其从事粉尘作业，这对控制和减少尘肺发生具有重要 意义。在研究尘肺发病机制时发现，转化生长因子一B(transforminggrowth 纤维化中起着重要的作用”l。它可以调控肺成纤维细胞分裂、增殖及胶原蛋白的合成与降解，并且在纤 态性与尘肺易感性的研究国内外未见报道。本研究在严格控制粉尘暴露因素的情况下，探讨TGF0基因 多态性与尘肺的关系，以求能为检测粉尘作业高危人群提供新的生物学检测指标。 对象与方法 1．研究对象： 本研究是在对575名接触矽尘作业工人和800名煤矿接尘丁人进行健康体检基础E，详细核实每名 I_L人的职业史，面对面询问吸烟情况。 断。以确诊的尘肺病人为研究对象，选择与病例年龄相差不超过5岁、同性别、同民族、开始接尘时问 及累积接尘工龄相差不超过2年、在弼一车闯或同一采掘工作面工作的非尘肺接尘工人为对照，进行l：1 配对。 2．血型测定： 现场采集空腹静脉血5ml，取一滴用于血型测定，其余用2％EDTA抗凝，冰盒保存备用。采用玻璃 片凝集法测定每个研究对象的ABO血型，抗A、抗B标准血清由南京军事医学研究所提供．效价1： 128。 3．TGF-B基因检测： 本研究从目前确定的7个等位基因中选择与纤维化关系比较密切的3个等位基因进行研究，包括： 琼脂糖凝胶电泳后，于凝胶成像系统下观察，根据PCR产物泳动的距离，参照DNA标准分子量泳动的 位置确定扩增效果，并对没有扩增出来的DNA进行二次扩增和电泳，观察后将扩增出来的DNA产物再 进行限制性酶切来判断扩增产物的基冈鹫。(4)基因型的确定：根据酶切后出现的条带数(与标准分子 量对照)分别确定TGF—B3个单核苷酸多态性位点的基因型(见图)。 5国家安全生产监督管理局资助项目(2002) 壮春、张淑杰)；开滦职业病防治所尘赫科(李翠兰) ．246- TGF—B(一509)、(+869)和(+915)位点基因片断凝胶电泳图 图a：卜3泳道为TGF 型。图c：l3泳道为TGFB(+915)基因片断扩增产物，4泳道为G／G基因型，5—7泳道为G／c基因型。 表1 TG卜B等位基因引物碱基序列 11．5和SAS 4．资料分析：所有数据录入前进行严格的校对，用Excel建库，SPSS 6．12软件进行数据分 析，定量资料选用1：1配对f检验；多分类有序及无序资料采用行×列表x2检验；配对计数资料采用 1：1配对x2检验；非参数检验采用配对符号秩和检验：多因素分析采用1：1条件logistic回归模型。 TGF—B基因型频率的计算采用直接计数法；等位基因频率=(该基因纯合子个体数X2+该基因杂合子数) ／总个体数×2。按Hardy—Weinberg平衡原理确认样本的群体代表性。 结果 1．一般情况 本研究是在1375名粉尘作业工人尘肺体检的基础上，选择I期男性、汉族尘肺病例117例，尘肺 异无显著性(pO．05)。对照组工种与病例一一匹配，工种相同。病例与对照组平均累积接尘工龄分别 布差异亦无统计学意义。两组的吸烟率分别为64．9％和52．4％，吸烟指数分别为6和7，其差别均无 与ABO血型有关。本研究比较了病例组和对照组之间的血型构成，经检验无统计学意义(，=2．677， pO．05)。 2．病例组与对照组 TGF—B基因型和等位基因频率比较：分析发现，一509位点的cc基因型频率病例组高于对照组，差 异有显著性(PO 05)。两组+915位点的因型频率差异有显著性，由于cC基因型在人群中的分布频率极 低，本次研究中未发现该基因型。+859位点各基因型在病例组和对照组问的分布差异无统计学意义，结 果见表2。对TGF—B3个等位基因携带率进