早期干预对边缘型维生素A缺乏幼鼠学习记忆的影响和机制研究.pdfVIP

早期干预对边缘型维生素A缺乏幼鼠学习记忆的影响 及机制研究 李廷玉·，毛春婷，瞿平，赵勇，王容，刘友学 ·重庆医科大学附属儿童医院重庆市儿童营养研究中心 A 维生素A缺乏(vitamindeficiency，VAD)是发展中国家孕妇的重要健康问题，我国重 庆地区孕妇可疑的亚临床VAD达33．3％，孕期VAD问题已引起人们高度关注。国外有几项成 年鼠的研究发现VAD引起的学习记忆障碍随着vA的补充可以完全恢复“1。但本课题组前期工 vitaminA 作发现，从胚胎期开始的边缘型维生素A缺乏(marginal deficiency，ⅡVAD)会 损害仔鼠的学习记忆功能，生后4周(相当于人类的幼JL)开始vA干预，这种障碍不能完全 恢复…。故本研究欲给予胚胎期和新生期的早期干预，了解其学习记忆的恢复情况，拟从vA 与其受体结合后，调节与长时程增强(LTP)的相关基因入手，初步探讨MVAD影响仔鼠学习 记忆的机制，为临床和社区人群VA干预时机提供建设性资料。 材料与方法 一、实验动物 第三军医大学实验动物中心提供清洁级健康雌性Wistar大鼠12只，体重230～2509， 6500 随机分为4组：(1)正常对照组母鼠3只，给予vA充足饲料(含VAU／kg)，共产仔 37只，随机抽取10只仔鼠用于本实验，仔鼠饲料同母鼠；(2)MVAD组母鼠3只，给予 400 MvAD饲料(含VAU／kg)…，共产仔41只，随机抽取19只仔鼠用于本实验，仔鼠饲料 同母鼠； (3)胚胎干预组(VAIl组)母鼠3只，给予mD饲料至孕14天，然后改饲对照 组饲料，共产仔38只，随机抽取10只仔鼠用于本实验，仔鼠饲对照组饲料。(4)新生干预 组(vAl2组)母鼠3只，给予MVAD饲料至分娩，然后改饲对照组饲料，共产仔34只，随机 抽取13只仔鼠用于本实验，仔鼠饲对照组饲料。各组母鼠给予实验饲料3周后，与健康雄性 Wistar大鼠交配，各组仔鼠均于6．5周进行穿梭箱主动回避反应实验，7周龄处死。 母鼠及仔鼠用不锈钢鼠笼饲养，自由进食及饮用蒸馏水，温度19C～25C，湿度55％～ 65％，每日光照12h，鼠笼每日清洁消毒1次。在动物饲养和实验过程中，遵守实验动物管 理与动物保护的有关规则。l：2雌雄合笼，第二天早晨8点检查阴栓，发现阴栓者记为孕0．5 天。要求控制母鼠产仔量为8～14只，不符合条件的仔鼠未纳入实验对象。 二、血清vA浓度测定 母鼠剪尾取尾静脉血0．5～1．0ml，仔鼠断头取血0．5～1．0ml，静置后，离心3000 lJ r／min，收集200i血清，加入无水乙醇、正己烷提取vA，氮气吹干，流动相溶解后，用 min。 vA浓度。检测波长313SIR，流速1．4ml／min，保留时间3．8 三、穿梭箱主动回避反应实验… 大鼠具有趋暗避光特性，6．5周龄仔鼠为测试对象，穿梭箱有两室，暗室内大鼠接受电 击，亮室没有电击，一盏40瓦电灯作为条件刺激。在灯光刺激后的5s暗室给予电击，每分 钟测试一次。多次训练后，大鼠能在灯光刺激后的5s内跑到亮室以逃避电击，为主动性回 避反应。如果连续10次测试中出现9次条件回避反应，即认为大鼠已经学会。大鼠学会回避 的训练次数越少表示学习记忆功能越好。可否省略此段!!! 四、海马脑片LTP诱发“1 将7同龄仔鼠断头处死，取出全脑置于人工脑脊液(4℃)，游离出海马，取中间1／3 u 段，连续切成350～500m厚的脑片，移入脑片浴槽中孵育，温度维持在(34±1)℃，人 工脑脊液的流速为l～1．5ml／min，并通入95％02、5％C0z的混合气体。孵育60min后，在解剖 显微镜直视下，将钨丝双极刺激电极置于CA3区的Schaffer侧支处，将玻璃记录微电极置于 CAl区锥体细胞层。以单通道脉冲刺激(测试刺激，波宽0．2ms)诱发场兴奋性突触后电位 (field excitatorypostsynapticpotential，