猪链球菌病三价灭活疫苗(2型LT株%2b7型YZ株%2bC群XS株)效力检验试验.pdfVIP

118国家星火培训计划及国家农业行业科技：箜±二昼全垦塑夔丝堡扬圭蔓壅煎鉴蕉兰龇童壁婴过全迨塞童堑丝 效力检验的试验 陈波，康超，陈章表，徐高原，金梅林 (武汉科前动物生物制品有限责任有限公司) 冀要；猪链球菌可以引起多种动物和人严重疾病的病原菌，有着较高的死亡率，并且可以感染人引 起死亡，给养猪业和公共卫生带来严重威胁。由于我国还缺乏对该病的系统的研究，鉴于这种情况，本研 究从中筛选出猪链球菌2型、猪链球菌7型和马腺疫链球菌兽疫亚种(C群)三个血清型各10株菌。对链 球菌三个血清型的生物学特性(培养特性、生化特性、致病性、血清学特性、分子生物学特性)进行全面 的研究，并用PCR方法对毒力因子进行鉴定。在对筛选出猪链球菌2型、猪链球菌7型和马腺疫链球菌兽 疫亚种(C群)三个血清型各10株菌进行生物学特性研究的基础上，筛选出毒力强，免疫原性好的菌株作 为疫苗株进行猪链球菌三价灭活疫苗的研制。在疫苗研制时加入进口白油佐剂，并对本实验室制备的猪链 球菌三价灭活疫苗进行了安全性、免疫效力、免疫持久期等试验。试验证明，本实验以进口白油佐剂疫苗 安全、有效、免疫效力可持续6个月以上。 关键词：链球菌；动物试验：油乳剂灭活苗 猪链球菌(Streptococcussuis，SS)是引起多种动物和人严重疾病的病原菌，作为一种兼性厌氧的 革兰氏阳性细菌，通常存在于猪的上呼吸道，可引起猪的脑膜炎、关节炎、心内膜炎、败血症、以及断奶 仔猪的猝死，并且可感染人。世界各地均有发生，该病已成为严重影响各国养猪业发展的重要的疾病，也 是一直困扰我国养猪业的主要传染病之一．近年来该病又有抬头的趋势。现对中部及南方地区猪链球菌病 的流行病学调查发现，引起猪发病、死亡的链球菌主要有2型，7型和C群，该病不仅给养猪业造成了巨 大的经济损失而且给人类也造成了严重的危害，同时在公共卫生和食品安全上也显得十分重要，应引起人 们高度的重视。目前市售商品苗只有猪链球菌2型、马链球菌兽疫亚种二价疫苗，但当前猪链球菌7型也 较常见，现有疫苗不能对其起到预防作用，而且市售商品疫苗需多次免疫，成本较高，对猪只的应激较大。 因此，急需研制出更安全高效的新型猪链球菌病疫苗对其进行预防。 1材料和方法 1．1．1疫苗候选菌株 在临床上所分离、鉴定毒力强，免疫原性好的菌株用于制备疫苗菌株。由华中农 分离于湖北罗田某猪场有神经症状、急性死亡猪的心血：血清7型Yz株于2005年8月分离自湖南永州某 猪场送检的病料；兰氏c群XS株于2003年5月分离于浙江萧山某猪场发病猪的关节。 1．1．2培养基TSA固体培养基用于复苏菌种、纯化增殖；TSB液体培养基用于疫苗菌株的大量增殖。 国家星火培训计划及国家农业行业科技：第十一届全国规模化猪场主要疫病监控与净化专题研讨会论文摘选 119 TSA固体培养基和TSB液体培养基均购自Difco公司。 1．1．3佐剂 远航试剂厂。 1．1．4试验动物1：昆明小鼠购自湖北省疾病控制中心，SPF级。2：25—30日龄仔猪购自湖北天种 股份有限公司非免疫健康猪群。采集血清样品经ELISA抗体检测猪链球菌抗体均为阴性，并在隔离的条件 下饲养。 1．2方法 1．2．1培养将制苗用的三株链球菌2型、7型和C群冻干菌株分别用接种环接种于TSA固体培养基中。 然后再将一级种子接种TSB液体培养基中。嚣37℃培养8小时。按《中国兽药典》进行纯粹检验。合格后 作为二级种子。将鉴定合格的二级种子按2％接种TSB液体培养基中。置37C培养12小时。 1．2．2活菌计数将振荡均匀的单菌液培养到对数生长期8小时后各取出Iml分别计数。按照常规10倍 上的菌落数(CFU)． 1．2．3灭活 将检验合格的菌液按菌液总量的4％0加入甲醛。置37C灭活24小时。中间振摇几次。然 后进行灭活检验，应无细菌生长为合格。 1．2．4浓缩 将灭活合格的菌液离心，并按照灭活前细菌计数结果用生理盐水调节菌液浓缩到4．5× 109cFU．然后取样做无菌检验，应无细菌生长为合格。 1．芝．5配苗 用已灭活合格的浓缩菌液按1：1：1混合再加入终浓度为4％的灭菌吐温作为水相。并将 准备好的油相用匀浆机按水相、油相l：1．5比例混合乳化。在终止搅拌前加入1％硫柳汞溶液使其终浓度 为0．01％。 1．2．6灭活疫苗无菌检验 将制备好的链球菌灭活苗按照《中国兽药典》采用TG、GA、GP做无菌检验， 应无菌生长为合格。 1．2．7安全性试验 断奶仔猪安全试验