蝎类Kunitz型双功能毒素蛋白Lmkkt-1a的相关探究.pdfVIP

瞳磁e 蝎类Kunitz型双功能毒素蛋白Lmkkt—la的相关研究 罗凡1，陈宗运2，曾丹云1，吴英亮2姜凌1★，刘买利r (1．中国科学院武汉物理与数学研究所波谱与原子分子国家重点实验室，武汉磁共振中心，武汉430071； 2．武汉大学生命科学学院病毒学国家重点实验室，武汉430072) 蝎类Kunitz毒素蛋白来源于蝎的尾液腺，能特异性抑制钾离子通道活性。最近，我们 通过对编码蝎毒素的相关基因组进行研究，分离得到了一系列Kunitz型蝎毒素，它们除了 具有良好的钾离子通道抑制活性，还具有抑制胰蛋白酶的功能，是一种具有双功能的蝎毒 素分子。目前，对此类蝎毒素的研究非常缺乏，对其溶液结构以及生物学功能的作用方 式，以及进化起源都知之甚少。 在本文的研究工作中，我们利用液体核磁共振解析了第一个Kunitz型双功能蝎毒素蛋 白LmKKT-la的溶液结构：该蛋白由59个氨基酸组成，二级结构含有2个Q螺旋，1个B 定起到重要作用。尽管LmKTT．1a的溶液结构与来自其它物种(例如蜘蛛、蛇等)的 Kunitz型钾离子通道抑制蛋白相似，但是LmKTT．1a采用了一种全新的二硫键配对模式， 通过突变研究发现，在LmKKT．1a分子中，新发现的二硫键配对模式不能与经典的二硫键 配对模式共存，否则蛋白分子的双功能活性大为下降。除此之外，LmKKT．1a的基因序列 andK— 和生物活性也有别于目前已知的四种Kunitz型蝎毒素亚类Q．KTxs，13-KTxs，y-KTxs KTxs。综合结构生物学研究以及基因组学研究，我们将LmKKT—la以及另外数个与之类同 的毒素归于一个新的Kunitz型蝎毒素亚类6．KTxg。 通过对新的Kunitz型蝎毒素亚类蛋白的结构、生物功能以及基因组学研究，有望进一 步丰富蝎类Kunitz型毒素的种类，以及该类毒素的进化途径。 图1．LmKKT-la的溶液核磁共振结构。(A)．20个最 低能量状态的结构系综；(B)．飘带示意图。 1．NMRsolutionstructureof Figure LmKKT-la．(A) A ofthebackboneatomsof convergedrepresentation the20beststructuresofLmKKT-la．(B)Ribbon ofthebackboneofLmKKT-la． presentation tity％ LmKTT一1a OO Anntoxin 44 Conkunitzin-S1 39 BPTI 38 APEKTxl 42 K 3 Dendrotoxin HWTX—X工