针刺对孕期高雄大鼠雄性子代胰岛素抵抗的实验探究.pdfVIP

全国中西医结合生殖健康学术研讨会 针刺对孕期高雄大鼠雄性子代胰岛素抵抗的实验研毙 魏丽娜彭艳杨新明吴效科 黑龙江中医药大学附属第一医院妇产科 国家自然科学基 高雄激素血症和胰岛素抵抗是多囊卵巢综合征(PCOS)的主要特征，同时也是其主要遗传特 征，男女皆有可能发病，具有明显的家族聚集现象。然而目前研究孕期高雄环境是否会导致后代女 性发生PCOS，男性发生高雄激素血症和胰岛素抵抗的报道十分少见。因此，研究孕期高雄环境诱导 子代高雄激素血症和胰岛素抵抗的模型十分必要。本研究通过检测血清DHEAS、睾酮、皮质醇、17一 羟孕酮及胰岛素、血糖变化，探讨针刺对孕期高雄大鼠雄性子代的治疗效果。 材料与方法 1．造模与分组 上，由黑龙江中医药大学实验动物中心提供。 (2)造模在大鼠孕期用丙酸睾丸酮诱导子代雄性大鼠高雄激素血症和胰岛素抵抗模型。上述大 白鼠在妇科实验室完全随机分两批(模型组和油剂组)雌雄合笼，常规喂养。每天对雌鼠进行阴道 涂片、HE染色观察受孕情况，发现受孕的雌性大鼠从笼中取出单独喂养。模型组的雌鼠在孕16天时 给予每只一次性颈背部皮下注射丙酸睾丸酮3．7mg／kg，连续注射三天。油剂组的雌鼠在孕16天时给予 每只一次性颈背部皮下注射等剂量的油剂，连续注射三天。以其所生的子代雄鼠为实验对象。产后 2l天时处死原代雌鼠和雄鼠。在子代大鼠长至2月龄时，雌雄分笼，子代雄鼠单独饲养。之后，对原 代孕鼠皮下注射丙酸睾丸酮所生的子代和皮下注射油剂的子代大鼠进行血清硫酸脱氢表雄酮、睾酮 和皮质醇和胰岛素的检测，同时做空腹血糖和OGTF试验，观察雄激素水平和胰岛素水平有无异常。 至此，建立高雄激素血症和胰岛素抵抗的大鼠模型阶段结束。实验过程中，所有大鼠在同问清洁、 通风良好、室温25℃的动物房中饲养，自由饮水和摄食。动物饲料为黑龙江中医药大学动物实验中 心提供的常规饲料。 (3)分组处理从模型组的子代雄鼠中随机选出17只雄鼠作为实验对象，再次完全随机将这17只 雄鼠分为针刺组和对照组。针刺组每天进行捆绑固定并电针刺激大鼠丰隆、足三里、三阴交、天枢 7次为一个疗程，连续治疗两个疗程后检测这两组大鼠体重和血硫酸脱氢表雄酮、睾酮、皮质醇、胰 岛素、血糖等水平的变化。 实验动物分组情况如下： ①油剂组：同龄同种在相同条件下饲养的雄性大鼠。 对照组：每天进行抓取和搁绑固定刺激30min，不予针刺。 ②模型组 针刺组：每天进行捆绑固定，电针针刺刺激30rain。 论文及摘要集·大会交：流 2．主要试剂与仪器 岛素放免试剂盒由黑龙江中医药大学同位素科提供；血睾酮放免试剂盒由黑龙江中医药大学同位素 科提供；血皮质醇放免试剂盒由黑龙江中医药大学同位素科提供；17一羟孕酮由黑龙江中医药大学 同位素科提供；大鼠硫酸脱氢表雄酮(DHEAS)定量酶联检测试剂盒购自上海森雄科技实业有限公 司。 (2)主要仪器：脉冲电疗仪KWD一808为常州市武进长城医疗器械有限公司；罗氏血糖测定仪 为美国罗氏；血糖试纸为天津市华鸿医材有限公司；台式高速离心机为BECKMAN；转轮式切片机 数字酸度计PHS一3C为上海朋顺；全自动光学照相系统为OLYMPUS。 3．观察内容与方法 (1)针刺对大鼠体重和体内脂肪等的影响：分别用电子体重测量仪和电子精密天平测量。 (2)空腹血糖和血清DHEAS、T、胰岛素、皮质醇的基础值 禁食水12dx时，用血糖仪测定大鼠空腹血糖值；给予大鼠尾部采血3ml，分离血清，置于一20。C 冰箱中保存，待测血清DHEAS、T、胰岛素和皮质醇的水平。 (3)OGTr试验 血糖值。同时在给予大鼠葡萄糖灌胃60min时尾部采血1．5ml，待测血清胰岛素水平。 ’ (4)ACTH试验 采血3ml，待测血清DHEAS、T和皮质醇的水平。 (5)血清睾酮、胰岛素和皮质醇：用放射免疫法检测。 ． (6)血D