重组菌E.coli+BL21%2fpET28-penp摇瓶发酵条件优化.pdfVIP

i l BL2 ET2 n 重组茵E．co 1／p 8一pep 摇瓶发酵条件的优化 杜连祥 赵洪坤 李玉 路福乎 天津耩技大学生物工程学院 天津审工业微生物重点实验宣 【摘要】目的研究对青霉素酶鲎组菌E．coY 皋鼹单落素震验对工程菌￡coli 度对青霉索酶表达形式秘影响。结果研究发现伴随温度辩降低可溶惶蛋白含量遂渐增加，在培养温度为 250c时目的蛋白绝大部分以可溶性形式存在，经优化后酶活力达到了480Ulml，较优化前(227．8U／m1) 提高了筠篇。鳍瓷确立了重缎薯程蓥E．co努BL2王《DE3)／pET28-penp播赢发酵条俸。 【关键词】青霉索酶；可溶性表达；摇瓶条件优化 青霉素酶(Peniciltinase，Ec3．5．2．6)是 较鬃贵，有些产酶菌还需要添加大量赣霉素诱导， §一内酰胺酶的一种，因能特异性地水解青霉素的 所以生产成本较高。为了提高酶活力，一些国外 彝一蠹酰黢环使毒霉素失活，两具有广泛的工监震 学者将膏霉素酶基因克隆蓟原核表达体系莠实现 途，如它在乳品生产中可以水解牛乳中残留的青 了青霉潦酶的高水平表达，在国内来见青霉素酶 霉素，生产无抗奶；在临床检测中，它可以作失 异源表达的相关报道。本实验室成功蛾将蜡样棼 酶联免疫检测睾翡标记物；在莲药嚣韭它在撬生 孢轷嚣ATCCl0987来源麓赘霉素酶基因壳隆到 絮无菌检测、青霉素过敏反应的治疗，药物设计 pET28a(+)表达载体上，并实现了活性表达。本 审帮褥到7应用；另岁}近年来脊霉素酶生纺传感 研究戳她工程菌霆coli 器也成为研究热点，其可对牛奶中青霉素残留量 础，进行发酵条粹优化，试图迸一步提高酶活力。 进行快速定爨测定和对青霉素发酵过程中的效价 1、材料 进行在线测定。 重缀表达矮粒pET28-penp壹本实验室妻行 青霉素酶产生菌多为芽孢秆菌属，蜡样芽孢 构建；最coliBL21由本室保藏。蛋囱质分子量 轷菌是产生胞外青霉索酶的典型微生物，蜓是匡 标准、卡那霉素鞠IPTG均赡爨上海生物工程有限 瘛舞摄道这稃菌不但产酶量都较绦，磊蠢培养基 公司。 ·571· 2(X)7年全国发酵行业高峰论坛 2·5 f B培养荜：1％胰蛋白胨．05％酵母粉，1％氯 2 0， 化钠，p玎7 1 5 2方法 蠹 l 2 l摇瓶种子培养 O·5 挑取单菌落转接到装仃$OmlLB培养瑟的 250mi，锥形瓶中【告有30ug／jI】L的卡耶譬襄]． 0 2 4 6 8 1012 37℃．180r／m]n培养过彼作为种子。 22发酵条件优化 圈1工程茁生长曲线 扔始发酵条件：拭1％的接种量将种子接八 u ．3 2韫应对【{的蛋白表选的影响 50ral．LB培养基的250m1，锥形瓶中(禽有30g／mL 的}郇霉索)当丸