动物外用止血剂的制备.pdfVIP

动物外用止血剂的制备1 * 高超，高学军 ，金鹏，洪琴，陈起 东北农业大学动物医学学院，黑龙江哈尔滨 （150030 ） 摘 要：为提供外用止血剂用于兽医临床，本实验利用凝血酶原、凝血因子Ⅹa 、凝血因子 Ⅴ采用正交实验设计确定了凝血酶原酶复合物各种成分的最佳浓度从猪血中制备凝血酶，并 根据兽医临床上的需要制成适合动物外用的止血剂型。该止血剂可以应用于兽医临床，是国 内外兽医临床的新型外用止血剂。 关键词：猪血；凝血酶；动物外用止血剂 动物外用止血药不仅在传统的兽医临床领域应用规模日益扩大，特别是在一些特殊的畜 牧业生产中，如鹿锯茸止血、胆汁引流，珍奇动物及宠物手术过程中，需求量也相当巨大。 因此急需开发一种可直接外用的高效止血药物，以填补这方面生产技术及产品空白，满足巨 大的市场需求[1] 。凝血酶除直接作为止血药物，还可以与其他药剂配伍，制成新的剂型。它 具有传统止血药剂不可比拟的优点：止血迅速快，疗效确切；应用范围广，临床各科发生的 毛细血管、小血管及实质性脏器出血均可应用；用药方便、安全，可口服或局部喷洒、涂布、 [2] 直接作用于出血部位，不干扰体内抗凝血功能，有助于组织修复，加速创面愈合 。 1 材料和方法 1.1 实验材料与仪器 1.1.1 实验材料 ①凝血酶原、凝血因子Ⅹa、凝血因子Ⅴ、猪脑磷脂和Ca2＋，东北农业大学生命科学与 [3,4] 生物技术研究中心制备 。 ② 凝血酶标准品，Sigma 公司；其余试剂均为市售生化试剂或分析纯试剂。试剂、溶 液按照生物化学与分子生物学相关工具书和相关说明书配制。 1.1.2 主要仪器设备 TM Alphaimager 2200 凝胶成像系统，美国Alpha ；DYY-5 型稳压稳流电泳仪，DYCP-24A 型电泳槽，北京六一仪器公司；电子天平，PB20 型pH 计，德国Sartorius 公司；-70℃低温 冰箱，日本SANYO 公司；CDMC-21 层析工作站，上海金达生化仪器公司。 1.2实验方法 1.2.1凝血酶原的激活 5 采用凝血酶原活酶复合物应用正交试验 L16 （4 ）对凝血酶原进行激活，此复合物包括 FV 、FXa 、磷脂和 Ca2＋，根据纤维蛋白原凝结时间，找到它们的最佳组合，确定最佳激活 条件[3,4] （见表1）。将激活后凝血酶放入-80℃的冰箱内预冻15min，然后放于冻干机内冻干。 1本课题得到东北农业大学2005 年度大学生科技创新基金资助。 -1- 表1 正交试验设计 Tab1 Orthogonal Design 试验号 FV(µg/mL) FXa(µg/mL) 磷脂(µg/mL) CaCl2(moL/L) 反应时间(min) 1 25 10 40 0.01 5 2 35 15 60 0.02 15 3 45 20 80 0.03 25 4