三种聚丙烯酰胺凝胶提纯电泳在蛋白质提纯中的应用.pdfVIP

维普资讯 验医学2005年第20卷箜 塑 璺!翌 ! 堕 ! ： ! 文章编号 ：1001-2087(2005)05-0439-03 中图分类号 ：Q503 文献标识码 ：A 三种聚丙烯酰胺凝胶提纯电泳在蛋白质提纯中的应用 孙臣忠 ， 王永文 ， 张 蕾 (1．上海市传染病医院检验科，上海 200085；2．通化市人民医院检验科，吉林 通化 134000； 3．上海市第一人民医院检验科，上海 2~080) 摘要：目的 探讨 3种聚丙烯酰胺凝胶提纯电泳在蛋 白质提纯中的应用。方法 用普通聚丙烯酰胺凝胶提 纯电泳 (PAGE)、等电聚焦提纯电泳(1EF)和等速提纯电泳 (1TP)对样品进行分离。结果 3种提纯电泳均可分 离蛋白质。PAGE的区带分辨率低，加样量不高；1EF的区带分辨率最高，可分离同种蛋白的亚成分，加样量最 小；1TP区带分辨率较高，可将样品分成单一成分，加样量最大。结论 低离子强度提纯电泳是可行的，分离效果 令人满意 。 关键词：电泳 ；聚丙烯酰胺凝胶电泳 ；等电聚焦电泳 ；等速电泳；蛋白提纯 Theapplicationofthreekindsofpolyacrylamidegelelectrophoresisforthepurification ofprotein SUN Chenzhong，WANGYongwen，ZHANGLei． DepartmentofClinicalLaboratory，ShanghaiMunicipalHospitaloflnfec— tiousDisease，Shanghai200085，China Abstract：Objective Toevaluatethreekindsofpolyacrylamidegelelectrophoresisinpurificationofprotein． Methods Theproteinwaspurifiedbycommonpolyacrylamidegelelectrophoresis(PAGE)，isoelectricfocusingelec— trophoresis(1EF)andisotachophoresis(1TP)．Results Theproteincouldbeisolatedbythreekindsofpurification electrophoresis．TheresolvingpowerofPAGEwaslow andtheloadofsamplewaslow．TheresolvingpowerofIEFwas thehighestandtheloadofsamplewasthelowest．Th eresolvingpowerofITPwashighandtheloadofsamplewasthe highest．Conclusions Thepurificationelectrophoresiscanbeoperatedin low ionicstrength．Theresultissatisfying． Key words：Electrophoresis；Polyacrylamidegelelectrophoresis；lsoelectricfocusing；lsotachophoresis；Protein purification 电泳作为一种技术，在医学和生物学研究中 为国产分析纯。试剂配制 ¨：(1)胶体母液 ：30g 应用很广，但绝大多数用作分析，而很少用于提纯 丙烯酰胺和0．8g甲叉丙烯酰胺 ，加水至 100ml， 生物大分子 ，其原因在于操作复杂和对仪器要求 4。c避光保存 ；(2)PAGE胶体缓 冲液：1mol／L 较高。随着蛋 白质组学的发展，越来越多的蛋 白 HC148ml，Tris36．3g，加水至 100ml，pH值8．9； 质需要纯化 ，对一般实验