实验感染肉鸡组织中J亚群禽白血病病毒的抗原定位.pdfVIP

长江大学学报(自科版) 2006年9月 第3卷 第3期农学卷 JournalofYangtzeUniversity(NatSciEdit) Sep．2006，Vo1．3No．3AgriSciV 实验感染肉鸡组织中J亚群禽 白血病病毒的抗原 定位 杨玉莹 (长江大学动物科学学院，湖北剂州434025) 顾玉芳 ，王金玲 (内蒙古农业大学动物科学与医学学院，内蒙古呼和洁特010018) [摘要]从实验感染 J亚群禽 白血病病毒(ALV—J)的髓细胞性 白血病 肉鸡病例 中，选取典型病例 。用J亚群禽 白血病病毒单克隆抗体通过免疫酶组化试验对不同组织进行 了抗原定位观察 。结果显示；在实验感染阳性 肉鸡体 内实质组织细胞及瘤细胞 的核膜和细胞浆里可见不同程度 的棕黄色阳性反应 ．可为探讨 ALV—J对体 内组织细胞 的嗜性提供依据 。 [关键词]J亚群禽 白血病；抗原定位；免疫酶组化 [中图分类号]s852．4 3 [文献标识码]A [文章编号]l673一l409(2006)03—0l38一o3 J亚群禽白血病病毒 (ALV—J)属于禽白血病 肉瘤病毒群的一个亚群，其致病性具有特殊性 ，即同一毒 株可以引起不同的肿瘤 ，而不同毒株又存在引起同一种肿瘤的现象。对 ALV—J不同毒株的研究表明，它 主要诱发 肉鸡的髓细胞性 白血病 。英国Houghton家禽研究所在对 肉鸡进行肿瘤疾病调查和实验感染 肉鸡时发现，肉鸡群中成髓细胞性 白血病、组织细胞 肉瘤、多发性血管瘤 、纤维瘤 、成红细胞瘤等与 ALV—J 有关 。 髓细胞性禽白血病主要是以禽骨髓组织中幼粒细胞及其前体细胞过度增生的肿瘤性疾病 。此病在世 界范围内广泛流行 ，它不仅引起患病鸡的死亡和淘汰，而且引起鸡群生产能力的普遍下降。在中国，ALV— J感染肉种鸡后 ，不同地区发病率有所不同，可达 3O％～4O％。它不仅在肉鸡 中发生 ，而且在蛋鸡 中也有 发生。关于J亚群禽白血病 ，从其病原分离鉴定、病毒分子生物学特性 、病毒膜表面糖蛋 白的克隆和表达 以及实验病理学、骨髓病理学和血液学等方面 ，许多学者作了较为详细 的研究n 。而 ALV-J病毒在体 内感染过程、病毒在感染细胞中的定位不是很清楚 。本试验采用感染 肉鸡的典型病例组织块 ，用 ALV-J 单克隆抗体进行免疫酶组化试验，以期通过病毒在组织 中定位的观察，来探讨病毒对感染细胞的嗜性，为 疾病诊断提供理论依据 。 1 材料与方法 1．1 材料 ALV-J单克隆抗体 由扬州大学秦爱建教授惠赠；辣根过氧化物酶标记的羊抗 鼠免疫球蛋 白购于北京 中山生物工程有限公司。 1．2 玻片的预处理 将载玻片放人洗液浸泡 24h后，流水漂洗 ，再用蒸馏水冲洗 5遍 ，浸泡在 95 酒精中后取出擦干。取 0．596／多聚赖氨酸涂抹于载玻片上晾干后备用。 将盖玻片于0．5 盐酸酒精液中浸泡 2min后 ，移人 95％酒精 中后取出擦干备用。 1．3 组织切片的处理 选取 ALVJ内蒙毒株实验感染肉鸡典型病例 ，选取肿瘤、骨髓 、肝脏 、脾脏、肾脏、睾丸等组织块以 5 m厚度切片置于载玻片上，烤干备用。 [收稿 日期J2oo6—03—07 [第一作者简介]杨玉莹(1962一)，男，天津市人．农学博士．长江大学动物科学学院研究员，主要研究方向为动物病毒学与病理学 第3卷 第3期 杨玉莹等：实验感染肉鸡组织中J亚群禽白血病病毒的抗原定位 1．4 免疫酶组化染色 染色流程如下 ：将组织切片按常规染色脱蜡至水 ，放入 PBS液洗涤 3min一用 3 过氧化氢一甲醇滴 于切片上，室温置湿盒内孵育3Omin— l：2O正常羊血清滴于切片上，湿盒内孵育 3Omin一将切片放入沸 腾的柠檬酸盐缓冲液 (pH 6．0)20min，冷却后用 PBS冲洗一取 出滴加 ALV—J单克隆抗体 (1：200)5O～ 8O L于 37℃ lh，PBS冲洗一滴加二抗 (羊抗鼠IgGl：200)50~80 L室温30min，PBS冲洗一加 DAB 显色，湿盒 i0~30min，蒸馏水冲洗一苏木素复染一常规法脱水 、透明、封片。 2 结果与分析 2．1 肿瘤的观察 显微镜下肿瘤组织主要由髓细胞样瘤细胞组成，胞体较大，圆形，胞核呈 圆形或椭圆形 ，胞浆内有多量 圆形嗜酸性颗粒。免疫组化显示 ，在肿瘤细胞胞浆内和核膜上呈现不同程度棕黄色染色反