沈波等荧光定量PR用于重组杆状病毒鉴定及病毒滴度检测的研究C.pdfVIP

沈 波等 荧光定量 用于重组杆状病毒鉴定及病毒滴度检测的研究 第 期 · · PCR 11 853 ·免疫学技术与方法· 荧光定量PCR用于重组杆状病毒鉴定及病毒滴度检测的研究 ① ① ① 沈 波 孟哲峰 彭 颖 吕建新 （浙江省台州医院检验科，台州 ） 317000 中国图书分类号 文献标识码 文章编号 （ ） R699.2 R373 A 1000-484X 200511-0853-037 ［摘 要］ 目的：建立一种高效、简便的荧光实时定量PCR方法，用于重组杆状病毒鉴定及病毒滴度的检测。方法：利用 载体系统在 菌株 中构建重组杆状病毒穿梭质粒（ ）和在昆虫细胞中构建含人 基因的 Bac-to-Bac E.coli DH10Bac Bacmid IL-18 重组杆状病毒，纯化的重组 作为 检测的标准模板，由昆虫细胞中收获的病毒母液用于空斑测定和病毒 提 Bacmid PCR DNA 取。以 倍梯度稀释的重组 作为标准模板，进行荧光定量 扩增 基因片段并绘制标准曲线，然后以提取的 10 Bacmid PCR IL18 重组杆状病毒DNA作为模板，采用同样体系进行实时PCR反应检测。同时，以琼脂糖空斑法测定病毒母液的滴度。结果：成 功构建了重组杆状病毒并建立了病毒滴度的实时荧光PCR检测方法。运用标准模板进行的PCR反应显示该方法的线形范 围为 1 8拷贝，病毒母液的 拷贝浓度（ ／ ）值约为空斑检测的滴度 ／ 值的 倍。结论：荧光定量 方法 10~10 DNA v ml fuml 10 PCR g p 可灵敏快速地鉴定重组杆状病毒，并在较大的线性范围内检测重组杆状病毒滴度，较之空斑法更准确地反映了重组杆状病毒的 实际数量。 ［关键词］ 荧光定量 ；重组病毒鉴定；病毒滴度 PCR IdentificationofrecoLbinationbaculovirusanddeterLinationofvirustiterwith fluorescence uantitativePCRassa q y ， ， ， ， SHEN Bo MENG Zhe-Fen PENG Yin LU Jian-Xin.Deartmento ClinicalLaborator Science g g p f y ， ， TaizhouHositalo Zheian Provience Taizhou317000 China p f j g ［ ］ ： Abstract ObectiveTodevelo areal-timePCRassasba