爱畜牧网站PH增值法和滴定法测定尿素酶活的比较.pdfVIP

饵《斟工业》·2008年囊29■蠢2 摘 要 将大豆粉在 140cc温度下热处理不 同时间，用滴定法和 pH增值法测定 了其 中脲酶活 性。结果表明，同一样品用滴定法和pH增值法测得的脲酶活性在数值上不相等，不能直接互用，但在 一 定条件下可以进行数值的相互代换。 关键词 大豆；脲酶活性；滴定法；pH增值法 中图分类号 $816．42 大豆是优质的植物性蛋白质饲料，它含有 35％一 拟对两种方法进行比较研究 ，以明确两种方法测定结 40％的蛋 白质 、15％ 20％的脂肪 和 20％ 30％的碳 果区别与联系。同时也希望通过对大豆中脲酶快速的 水化合物 ，并含有丰富的矿物质与维生素 ，因此素有 测定，可及时修订配合饲料生产过程 中对大豆及其制 “植物 肉”、“绿色 的牛乳”之美誉 ．是 目前世界范围内 品的正确加工及使用方法．经济 、有效地消除抗营养 动物饲料原料中最常用的植物性蛋 白质类饲料 l【】。但 因子的抗营养作用。 同时，大豆中也含有影响动物对饲料中营养物质的消 1 材料与方法 化、吸收和利用的抗营养因子 ，如脲酶、胰蛋白酶抑制 1．1 大豆粉样品 因子等．并且当抗营养 因子的含量超过动物的耐受范 将普通市售生大豆粉碎 (非强热)过40目标准分 围时还会影响到动物的健康和生产性能。为此 ．我国 析筛 。在 140cc下分别处理 0、3、6、9、12、15、18、21、 制定 了专门的国家标准 ，如我国 《饲料用大豆》标准 24、27、30、33、36、39、42、45、48、51、54、57、60、63、66、 (GB10384--89)规定 ：“饲料用大豆需加热后使用 ，脲 69、72、75、78、81、84、87min，冷却后装入封 口袋备用。 酶活性不得超过 0．4NHgng／(g·min)”；我 国 《饲料用 1．2 化学试剂 大豆饼》标准 (GB10379--89)和 《饲料用大豆粕》标准 本实验所用试剂均为分析纯 (AR)，水为蒸馏水。 fGB10380--：-89)规定 ：“大豆饼和大豆粕的脲酶活性都 1．3 脲酶活性测定方法 不得超过 0．4NH3mg／(g·min)”。目前 ，在我 国较广泛 1．3．1 pH增值法 (△pH值法)2[-31 使用 的脲酶活性的测定方法主要有滴定法和DH增 ① 实验原理：将研细的试样与尿素缓冲液混合， 值法 ，其中，滴定法是 国家标准方法 (标准编号 GB／T 尿素在尿素酶作用下水解产生氨，使溶液 pH值改变， 1356787--1997)，具有仲裁性 。但是 由于滴定法要求 改变的程度与脲酶活性大小相关 ，因此可以用其与空 精度高，所用试剂品种较多 ，且配制复杂 ，测定过程中 白溶液的差值表示脲酶活性高低 ，单位为 ApH值。 操作时间较长，操作步骤较严格 ，给检测人员的批次 ② 主要试剂(尿素磷酸盐缓冲液)：分别称取4．3g 测定带来不便 ，难以迅速地指导生产 。所以在实际生 磷酸氢二钠和 3．4g磷酸二氢钾溶于 1000ml水 中， 产中，一般多用pH增值法测定脲酶活性。pH增值法 调节溶液pH值至 7．0。再称取 30g尿素溶于该磷酸 由于测定结果的准确度和精确度都不高 ，因此 ．不具 盐缓冲液中，并调节pH值至 7．0。 有仲裁性。为了更好的了解两种方法的利与弊．本文 ③ 实验方法 ：准确称取 0．400g样 品2份 ，分别 置于2支 25ml比色管中．其中 1支加入 20ml磷酸 盐缓冲液 ，作为空白试验管 ，另 1支加入 20llll尿素 卢晓凌 ，东北林业大学野生动物资源学院，150040，黑龙 磷酸盐缓冲液 ，作为试验管 ，立即盖好比色管塞并剧 江省哈尔滨市东北林业大学702信箱。