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菌物研究 2003 , 1 ( 1) : 52 - 54 Journal of Fungal Research Vol 1 , No1 , 2003 ISSN 1672 - 3538 用于 PCR 扩增的DNA 简易制备法现状 魏鑫丽1 ①, 魏江春1 , 2 ② 1 河北大学 , 生命科学学院 , 河北 保定 071002 2 中国科学院微生物研究所 , 北京 100080 摘 　要 : 介绍了6 种用于 PCR 扩增的DNA 简易制备法 。所得DNA 质量符合 PCR 扩增之用 , 经过试验也可用 于系统生物学之研究 。 关键词 : PCR 扩增 ; DNA ; 制备 中图分类号 : Q781 　　　文献标识码 : A 　　　文章编号 : (2003) 　　分子生物学技术是现代生物学 , 包括现代系 02 mol/ L EDTA , p H80 和 26 g TritonX - 100) , 统生物学研究中常用的技术 。因此 , 进行 DNA 加入 40 μ L 硅藻后混匀 , 即为反应管 。 的制备是必不可少的步骤 。通常用于 DNA 制备 12 　沉淀 DNA μ 的常 规 方 法 操 作 繁 琐 , 步 骤 多 , 含 7 ～ 10 反应管中加 50 L 待提取的样品液 , 即刻混 步[ 1 - 10 ] , 而且 , 由于提取液需多次转移 , 易引 匀 , 室温静置 10 min , 再次混匀后 , 12 000 g 离 起交叉污染和 DNA 丢失[ 11] 。此外 , 在酚 - 氯仿 心15 min , 丢弃上清液 。 法 、苯酚法 、CTAB 提取法中 , 由于酚很难去除 , 13 　洗脱 容易影响随后的酶切等后续工作的效率[ 1] 。鉴于 硅藻 - 核酸沉淀物用 GuSCN 缓冲液 ( 120 g 上述缺点 , 本文对散见于文献中的 6 种 DNA 简 GuSCN , 100 mL 01 mol/ L Tris - HCl , p H64) 洗 易制备法做一综述 。它们是 : ①硅藻 - 硫氰酸胍 涤 2 遍 , 70 % 乙醇洗 1 遍 , 56 ℃干燥沉淀物 10 ( GuSCN) 法[ 11] ; ②GTC 法[ 12 ] ; ③单管快速制备 min , 加适量 TE 缓冲液洗脱沉淀 , 洗脱液即为核 法[ 13 ,14 ] ; ④子囊盘切片扩增法 ; ⑤真菌孢子微 酸提取液 , 可用于 PCR 扩增等 。 波处理法 ; ⑥孢子磨碎扩增法 。这些制备方法不 该方法已成功用于临床血 、尿和组织等样品 仅操作简单 , 步骤少 , 而且 , 所得 DNA 质量符 的DNA 提取 , 具有简便 、可靠 、灵敏之特点 , 合 PCR 扩增及系统生物学研究之要求 。 约需 30 min 即可完成 , 而且整个过程只在一支 反应管中进行 , 避免了交叉污染 。 1 　硅藻 - 硫氰酸胍 ( Gu SCN) 法 2 　GTC 法 该法利用硅藻 ( diatom) 能够吸附核酸的特 性 , 以硫氰酸胍 ( GuSCN) 为助溶剂 , 使样品中 用于新鲜植物组织和培养细胞的 DNA 提取 的核酸与硅藻结合 , 经洗脱溶解处理即得到核酸 方法不适于干燥的植物组织 , 特别是木质组织和 提取液 。具体步骤如下 :