番石榴叶提取物体外抗轮状病毒的实验研究.pdfVIP

维普资讯 中国医药学报 2002年第 17卷第 8期 番石榴叶提取物体外抗轮状病毒的实验研究 陈 国宝 陈宝 田 (第一军医大学附属南方医院，广州 510515) 轮状病毒是全世界病毒性 胃肠炎 的主要致病因素之一。 果酸分别用双蒸水稀释到 500ml，取 233．1ml，浓缩至 84ml， 初步估计全球每年大约有八十万人死于轮状病毒性腹泻。 每只每天 2ml，相当于每只每天 口服番石榴 叶30g。番石榴 无论在发达国家或是发展 中国家，3岁前 的婴儿约 90％都 叶按常规煎制方法制成 0．3 ml的浓度 ，每 日按 0．6g／200g 要受轮状病毒感染 …。但轮状病毒感染 ，目前尚无特异的 给大 白鼠 (200±mg)灌 胃，连续 7天，对照组为正 常大 白 治疗方法 ，临床多以对症治疗为主。本实验在应用番石榴 鼠，7天后腹腔采血 ，无菌分离 血清 ，56℃水浴 30min灭活 叶治疗 HRV肠炎获得 比较好的临床疗效及番石榴 叶体外抗 后 ，过滤 ，一2o℃冻存 。 轮状病毒实验 的基础上 ，，从番石榴叶中提取 出i种成 1．4 细胞传代 MA 一140 细胞 以RPMI一1640为培养 份 ，进一步探讨 了其三种提取物含药血清的体外抗轮状病 基 ，37℃，5．0ml／Lco2孵箱培养 ，2天后换液，2天后单层 毒的机制。 传代，96孔培养板每孔50ul于37℃，5．0ml／Lco2孵箱中培 材料与方法 养成单层待用。 1．材料 番石榴 叶采 自第一军医大学药圃，经本校 中 1．5 病毒制备 人轮状病毒 DS一1解冻 ，用乙酰基胰 药鉴定 中心鉴定 为 Psidium guajavaL．(Myrtaceae)；病 毒唑 酶预处理病毒悬液30min，将 1ml病毒悬液接种于50ml细胞 (山西临汾制药厂生产)；胰酶 、乙酰胰酶、RPMI一1640培 培养瓶中已长成单层的 MA 一140 细胞上 ，再加入 RPMI一 养基 (SIGMA公司生产)；人轮状病毒 DS一1株 、恒河猴胚 1640培养液 5ml，置 于 37℃，5．0ml／Lco2培养箱 中培养 ， 肾细胞 (MA 一104)、轮状病毒 ELISA检测试剂盒 (A群) 每天观察细胞病变，三天后收获病毒。将收获的病毒悬液 购 自珠江医院生物高科技中心 。 用 40％的蔗糖溶液在 3万转 ／分钟的速度下超速离心 3小 时，可 以得到浓缩 的轮状病毒悬液 ，分装后置于 一2o℃冰 1．1 番石榴叶三种提取物的提取 ①将 番石榴 叶鲜叶 洗净 、晒干，放入烘 箱烘 烤后 粉碎。用 石 油醚浸 泡 三次， 箱保存 。 方法 每次 24小时，然后在常压下 回收得到墨绿色残 留物 ，将残 2．1 50％组织培养感染量测定 取病毒新鲜悬液 lml， 留物经水蒸气蒸馏得到淡黄色透明的挥发油 ，经 GC—MS分 乙酰基胰酶预处理 30min后，用 RPMI一1640培养液以 10倍 析为挥发油 J。②番石榴叶用石油醚浸泡脱脂三次后，脱 递次稀释成 10一10一10一。10一10一10一10一’10一10一个不同 脂后的叶子用 冷 乙醇提 取，醇提取物 浓缩后加热 水过 滤，