耐红霉素葡萄球菌中克林霉素诱导型耐药株的检测分析.pdfVIP

耐红霉素葡萄球菌中克林霉素诱导型耐药株的检测分析 目前,葡萄球菌是引起院内和社区感染,甚至全身感染的常见病原菌。特别是 耐甲氧西林的葡萄球菌（MRS）比例上升，使葡萄球菌对各种抗生素产生多重耐 药。MRS 可同时对 β -内酰胺类、酶抑制剂复合抗生素及碳青霉烯类抗生素耐药。 因此，临床医生在治疗由MRS 引起的感染者时，转而考虑使用大环内酯类（如红 霉素）、林可酰胺类（如克林霉素）和 β (族) 链阳霉素（如奎奴普丁,即MLSB 类 抗生素）。但有研究发现, MRS 可同时对 MLSB 类抗生素耐药,而且红霉素具有诱 导克林霉素耐药的作用。常规药敏试验不能检测可诱导克林霉素耐药的情况。用 K-B 纸片琼脂扩散法的 D -试验检测可诱导克林霉素耐药情况，了解检出的葡萄 球菌中可诱导克林霉素耐药株的发生率，以指导临床医生正确合理使用抗生素。 1 材料和方法 1.1 菌株 试验菌株为我科从本院临床送检各种标本分离的葡萄球菌 240 株。所有菌株 均经 Vitek-32 全自动分析仪鉴定。其中金黄色葡萄球菌 74 株,凝固酶阴性葡萄 球菌 (CNS)166株。用金黄色葡萄 ATCC25923 作为药敏试验的菌株。 1.2 主要试剂和 红霉素纸片（15μ g）和克林霉素纸片（2μ g）均购自英国 Oxoid 公司。培 养基为杭州天和试剂有限公司提供的 M-H 琼脂干粉，配制成 4mm 厚的平板供用。 GPI 鉴定卡和 GPS-110 药敏卡为生物梅里埃公司产品。Vitek-32 全自动细菌分析 仪。 1.3 药敏试验 使用标准的纸片琼脂扩散（K-B）法检测葡萄球菌对红霉素和 克林霉素的耐药性。 1.4 D-试验 采用 CLSI/NCCLS 推荐的方法［1］按照以上琼脂扩散法将浓度为0.5 麦氏单 位待测菌液均匀涂布于 M-H 平皿上，在两种药敏纸片边缘间隔为 15～26mm 的距 离分别贴上红霉素和克林霉素纸片，置于 35℃恒温孵育箱孵育 24h 判读结果。 若邻近红霉素一侧的克林霉素抑菌环出现 “载平”现象 (称为 “D”抑菌环)，即 克林霉素纸片的抑菌环看似一大写的 D 时，提示存在可诱导的克林霉素耐药,即 D-试验阳性 ;若不出现 “载平”现象，判为 D-试验阴性。 2 结果 2.1 240 株葡萄球菌对红霉素（EM）和克林霉素（CM）的不同耐药表型分布 EM -S 和 CM -S 者为 41.67%(100/240), EM -R 和 CM-R 者为 22.08%(53/240), EM -R 和 CM-S 者为 36.25%(87/240)。见表 1。表 1 240 株葡萄球菌对红霉素和 克林霉素耐药表型分布（略）注：MRSA：耐甲氧西林金黄色葡萄球菌；MSSA 对 甲氧西林敏感金黄色葡萄球菌；MRCNS：耐甲氧西林凝固酶阴性葡萄球菌；MSCNS： 对甲氧西林敏感凝固酶阴性葡萄球菌；S-敏感，R-耐药。表内数字为菌株数。 2.2 D-试验阳性 (红霉素诱导克林霉素耐药) 的发生率 对红霉素和克林霉素均敏感的 100株葡萄球 D-试验均为阴性 ;对红霉素耐药 而克林霉素敏感的87株葡萄球中,D-试验阳性46株,即红霉素诱导克林霉素耐药 的发生率为 52.87%，D-试验阳性株占全部葡萄球菌的 19.16% （46/240）。 3 讨论 葡萄球菌对红霉素和克林霉素的耐药表现为持续型耐药和可诱导性耐药两 种。持续型耐药是对红霉素和克林霉素均耐药，可用一般的药敏试验方法检测， 而可诱导性耐药是对红霉素耐药而克林霉素敏感的菌株，用一般的药敏试验（如 肉汤稀释法、仪器法等）都检测不出来。D-试验被用于检测红霉素对克林霉素诱 导耐药性,该方法简便易行,按常规 “K-B”法药敏试验操作，只是将红霉素和克 林霉素纸片按一定距离（如 15～26mm）放置,即可观察诱导耐药结果。我们采用 18mm 的纸片距离进行试验,结果易观察。 本试验结果显示，对红霉素和克林霉素同时耐药者占所检测葡萄球菌的 22.08%, 而在 MRSA 和 MRCNS 中占比率较高 , 分别占 61.53%(24/39) 和 37.03%(20/54) 。在对红霉素耐药而克林霉素敏感的金黄色葡萄球菌和 CNS 中 D-试验阳性者分别占 64.28% （18/28）和47.45% （28/59）,即克林霉素诱导型耐 药株的发生率分别为 64.28%和 47.45%。46 株 D-试验阳性菌株占所检测葡萄球菌 的