AlphaLISA法检测乙型肝炎病毒X蛋白方法学的建立.pdfVIP

一 1748 一 ChinJLabDiagn，November，2014，Vol18，No．11 EvidBasedComplementAhernat [13]武 毅，于晓风，曲绍春，等．人参果皂 对犬实验性心肌梗死的 PhaseIIGeneExpression[J]． 保护作用EJ]．中国药学杂志，2007，42(5)：345． Med，2O12，2012：490301． [143Kim CK，ChoDH，LeeKS．GinsengBerryExtractPrevents (收稿 日期 ：2014—04—21) Atherogenesisvia Anti—Inflammatory Action by Upregulating 文章编号 ：1007—4287(2014)11—1748—04 AlphaLISA法检测乙型肝炎病毒 X蛋 白方法学的建立 刘颖娟 ，夏 维 ，刘松梅 孙 ，沈 皤。，周 新。，张 红 (1．武汉大学 中南医院 医学科学研究中心，湖北 武汉 430071；2．武汉市妇女儿童医疗保健 中心 检验部，湖北 武汉 430016； 3．武汉大学 中南医院 基因诊断中心，湖北 武汉 430071；4．湖北省黄石普仁医院 内科 ，湖北 黄石 435O02) 摘要 ：目的 建立新型的均相检测技术 AlphaLISA(AmplifedLuminescentProximityHomogeneousAssay)法 ，检 测原发性肝细胞癌(Hepatocelluarcarcinoma，HCC)病人石蜡包埋切片组织 (Formalin-fixedandparaffin-embeddedtis— sue，FFPE)中乙型肝炎病毒 x蛋 白(HBx)。方法 采用针对 HBx蛋 白不 同表位 的两种单克隆抗体 X36C和 3F6一 G10，将其中一种抗体 X36C与受体微珠(AcceptorBeads)连接 ，另一种抗体 3F6一G10生物素化 ，再将 HCC病人 FFPE 总蛋 白提取液、供体微珠 (DonorBeads)及上述两种处理后的抗体在 23℃共同孵育90min后，用EnSpire2300多功能 酶标仪检测信号值。结果 FFPE蛋白提取液检测信号值为4667，HBx蛋 白标准品检测信号值为 3606；FFPE蛋 白 提取液样本对照、试剂对照 1(Bio一3F6一G10+Acceptor-X36C+DonorBeads)、试剂对照 2(buffer)的信号值分别为 5、 823、79；当生物素化抗体浓度为 0．1625nM 时，HBX检测信号达到最大峰值 ，即AlphaLISA出现 HookingEffect；AI— phaLISA法检测 HBX阈值下 限为 5pg。结论 本实验成功建立 了AlphaLISA法 ，用于检测 HCC病人 FFPE 中的 HBX。实验操作过程简单快捷 ，敏感性高于传统的ELISA技术 。 关键词 ：AlphaLISA；乙型肝炎病毒 X蛋 白；原发性肝细胞癌 中图分类号 ：R446 文献标识码 ：A EstablishmentofanAlphaLISA assayfordetectionofhepatitisB virusX protein inFFPE from hepatocellularcarcinoma patients LIU Ying—juan，XM Wei，LIUSong—mei，eta1．(MedicalResearchCenter，CenterforGeneDiagnosis， ZhongnanHospitalofWuhanUniversity，Wuhan430071，China) Abstract：Objective Toestablish