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l78 中国抗生素杂志2015年3月第40卷第3期 文章编号：1001—8689(2015)03—0178—05 spyl的DNA改组提高普那霉素的产量 金庆超 沈娜 杨郁 金志华 (生物与化学工程学院，浙江大学宁波理工学院，宁波315100) 摘要：目的 研究普那霉素产生菌株选育的分子育种方法，提高普那霉素的产量。方法 对来 自6种始旋链霉菌基因组重 排菌株的spy1调控基因，进行DNA改组研究，然后筛选阳性接合子进行发酵，HPLC法测定普那霉素两组分的产量变化 。结果 建立了普那霉素生物合成调控基因 J的改组基因库，筛选出71个spyl改组接合子。接合子的普那霉素I产量都有了不同程度的 提高，最高产量为出发菌株7．5倍，达60mg／L；普那霉素II产量则没有显著变化。结论 利用DNA改组技术进行调控基因的分子 进化可以有效提高抗生素的产量，为普那霉素分子育种研究中的首次尝试。 关键词：始旋链霉菌；普那霉素生物合成；DNA改组：spyl基因 中图分类号：R978．1 文献标志码：A DNA shufflingofspylleadingtoimprovedpristinamycinproduction inStreptomycespristinaespiralis JinQing—chao，ShenNa，YangYuandJinZhi-hua (SchoolofBiologicalandchemicalEngineering，NingboInstituteofTechnology,ZhejiangUniversity,Ningbo315100) Abstract Objective Toenhancepristinamycinproduction，molecularbreedingmethodforexcellent pristinamycin．producingstrainsofStreptomycespristinaespiralis．M ethods Sixhomologousspy1genesfrom high pristinamycin-producingstrainsofS．pristinaespiralisbygenomeshufflingwereshuffledandpositiveexcoNugants werescreenedoutfordetectionofpristinamycinproductionwithHPLC．Results Thefinalspy1shuffledlibraryof S．p，．ff以epfr口f wasconstructedand71exconjugantswereobtained．Comparedtotheproductionofwild-strain ATCC25486．pristinamycinIofallexco~ugantshadanimprovedyieldatvariouslevels．Particularly,highestPI yieldofasrtainreached60mg／L．with7．5．foldincrease．PristinamycinIIofexconjugantshadnoobviousproduction changes．Conclusion DirectedevolutionofregulatinggeneofpristinamycinbiosynthesiswithDNA shufflingwas aneffectivemethodofrantibioticproduction，anditwasfirstexplorationofrmolecularbreedingofpristinamycin production． Keywords Streptomycespristinaespiralis；Pristinamycinbiosynthesis；DNA shuffling；sp